VVC患者臨床分離白念珠菌ERG3、Efg1與唑類藥物耐藥關(guān)系的研究.pdf

1、目的：⑴了解本地VVC患者念珠菌菌種分布情況及對唑類藥物的敏感性。⑵探討VVC臨床分離白念珠菌ERG3、Efg1突變及表達(dá)水平與唑類藥物耐藥的關(guān)系。⑶探討VVC中白念珠菌Efg1與ERG3在唑類藥物耐藥中的相互關(guān)系。
　　方法：收集2015年11月至2016年5月就診于山西省婦幼保健院婦科門診的VVC患者陰道分泌物標(biāo)本184例，通過培養(yǎng)傳代、CHRO Magar念珠菌顯色培養(yǎng)、API20C AUX鑒定系統(tǒng)進(jìn)行分離鑒定，共獲得146

2、株白念珠菌。采用M27-A3微量肉湯稀釋法對其中50株白念珠菌行藥敏試驗(yàn)，將其分為敏感組和耐藥組。分別提取2組菌株的基因組DNA，進(jìn)行ERG3、Efg1特異性引物擴(kuò)增后測序，通過與genbank中的標(biāo)準(zhǔn)序列進(jìn)行比對，尋找其突變位點(diǎn)，探討基因突變與耐藥的關(guān)系；分別提取2組菌株的總 mRNA，逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA，通過熒光定量 PCR（RT-PCR）測其相對表達(dá)量，分析其表達(dá)水平與耐藥的關(guān)系，并探討 Efg1與 ERG3在唑類藥物耐藥中的相互

3、關(guān)系。
　　結(jié)果：⑴共收集 VVC患者陰道分泌物標(biāo)本184例，菌種分布顯示：白念珠菌146株（79.35％），光滑念珠菌22株（12.0%），熱帶念珠菌6株（3.62%），近平滑念珠菌5株（2.72%），克柔念珠菌2株（1.01%），其它3株（1.63%）。⑵體外藥敏試驗(yàn)顯示：50株白念珠菌對氟康唑（FCA）、伊曲康唑（ITR）、伏立康唑（VRC）的耐藥率分別為44%、56%和50%，且存在交叉耐藥現(xiàn)象。⑶基因測序顯示：ERG3測

4、序結(jié)果：1株出現(xiàn)R352H、2株出現(xiàn)W219C，此3株菌均對FCA、ITR、VRC交叉耐藥；Efg1測序結(jié)果：6株出現(xiàn)了V86I，其中1株對ITR單獨(dú)耐藥，余5株均為敏感菌株。⑷耐藥組（分別耐FCA、ITR、VRC及交叉耐藥）和相應(yīng)敏感組的ERG3、Efg1 mRNA相對表達(dá)量統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示：ERG3 mRNA表達(dá)量分析：8組數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，采用t檢驗(yàn)，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示。 FCA敏感組（2.01±0.60）高于耐藥組

5、（0.59±0.36），t=10.29，P＜0.001，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；ITR敏感組（2.21±0.52）高于耐藥組（0.73±0.43），t=10.97，P＜0.001，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；VRC敏感組（2.10±0.57）高于耐藥組（0.66±0.40），t=10.42，P＜0.001，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；全敏感組（2.54±0.39）高于交叉耐藥組（0.31±0.22），t=17.99， P＜0.001，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。E

6、fg1 mRNA表達(dá)量分析：4組耐藥組均不服從正態(tài)分布，采用秩和檢驗(yàn)，結(jié)果用中位數(shù)±四分位數(shù)間距（M±QR）表示。FCA耐藥組（2.02±2.78）高于敏感組（0.55±0.65），平均秩為39.5和14.5，P＜0.001，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；ITR耐藥組（1.74±1.75）高于敏感組（0.45±0.34），平均秩為36.48和11.52，P＜0.001，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；VRC耐藥組（1.88±2.22）高于敏感組（0.48±0

7、.50），平均秩為38和13，P＜0.001，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；交叉耐藥組（3.68±5.88）高于敏感組（0.34±0.11），平均秩為19.5和7.0，P＜0.001，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ERG3與Efg1相關(guān)性分析，采用Spearman相關(guān)分析，結(jié)果顯示相關(guān)系數(shù)r=-0.614，P＜0.001，二者呈負(fù)相關(guān)。
　　結(jié)論：②本地區(qū)白念珠菌感染仍在VVC中占主導(dǎo)地位，且對唑類藥物存在不同程度耐藥，故治療VVC時(shí)應(yīng)該以菌種鑒定和