真江蘺和孔石莼提取物對(duì)酪氨酸酶活性抑制作用的研究.pdf

1、酪氨酸酶(EC1.14.18.1,Tyrosinase)是一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的多亞基含銅氧化還原酶,廣泛存在于微生物、動(dòng)植物及人體中,是生物體內(nèi)合成黑色素的關(guān)鍵酶,具有獨(dú)特的雙重催化功能。多年來(lái),對(duì)酪氨酸酶抑制劑的研究一直備受?chē)?guó)內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注,因此,篩選酪氨酸酶的天然抑制劑可以為其在醫(yī)療美容、食品工業(yè)、農(nóng)業(yè)抗蟲(chóng)等多個(gè)領(lǐng)域提供理論依據(jù)。
　　 我國(guó)海域遼闊,海洋生物資源豐富,海藻養(yǎng)殖技術(shù)居于世界領(lǐng)先水平。真江蘺和孔石莼也是黃海、渤海海域

2、常見(jiàn)的大型經(jīng)濟(jì)海藻,其豐富的營(yíng)養(yǎng)成分和活性物質(zhì)也被逐漸應(yīng)用于醫(yī)療保健、飼料養(yǎng)殖、生態(tài)修復(fù)等多個(gè)方面。
　　 本文深入研究了真江蘺和孔石莼乙醇提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用,通過(guò)超聲波提取,單因素分析和正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)相結(jié)合的方法確定了這兩種海藻提取物的最佳提取條件；酶動(dòng)力學(xué)方法系統(tǒng)研究了兩種海藻提取物對(duì)酪氨酸酶的抑制作用機(jī)理和抑制作用類(lèi)型。相關(guān)研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　 1超聲波提取真江蘺中酪氨酸酶的抑制活性物質(zhì),通過(guò)單因素試驗(yàn)

3、與正交試驗(yàn)相結(jié)合的方法優(yōu)化提取條件。最佳提取條件為:超聲時(shí)間20min,超聲功率100w,料液比1g:16mL,乙醇濃度70％。采用有機(jī)溶劑萃取真江蘺乙醇提取物,分別得到乙酸乙酯組分、石油醚組分和水溶性組分,酶活性抑制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn):真江蘺這三種組分對(duì)酪氨酸酶均具有不同程度的抑制作用,半數(shù)抑制濃度IC50分別為0.6mg／mL、22.32mg／mL和7.85 mg／ml,其中,乙酸乙酯組分抑制效果顯著。Lineweaver-Burk圖顯示:真

4、江蘺乙酸乙酯組分、石油醚組分對(duì)酪氨酸酶具有非競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用,抑制常數(shù)(KI=KIS)分別為0.86mg／mL和1.96mg／mL；水溶性組分對(duì)酪氨酸酶具有競(jìng)爭(zhēng)性抑制作用,抑制常數(shù)KI為0.81mg／mL。
　　 2超聲波提取孔石莼中酪氨酸酶抑制活性物質(zhì)的最佳提取條件為:超聲時(shí)間8min,超聲功率100w,料液比1g:20mL,乙醇濃度70％。有機(jī)溶劑萃取實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),孔石莼石油醚組分對(duì)酪氨酸酶的抑制作用不明顯,乙酸乙酯組分和水溶性組

5、分對(duì)酪氨酸酶具有一定的抑制作用,IC50分別為1.75mg／mL和11.53mg／mL,乙酸乙酯組分抑制效果顯著。動(dòng)力學(xué)分析表明:孔石莼乙酸乙酯組分對(duì)酪氨酸酶表現(xiàn)為非競(jìng)爭(zhēng)性抑制,抑制常數(shù)KI=KIS為1.92mg／mL；水溶性組分對(duì)酪氨酸酶表現(xiàn)為競(jìng)爭(zhēng)性抑制,抑制常數(shù)KI為1.11mg／mL。
　　 3綜合兩種海藻對(duì)酪氨酸酶的抑制作用研究,真江蘺和孔石莼提取物中均含有多種對(duì)酪氨酸酶具有抑制作用的活性成分,且抑制作用顯著成分都集中在