運(yùn)用CLARITY技術(shù)進(jìn)行神經(jīng)疾病模型鼠的研究.pdf

1、光的散射性一直是阻礙生物大組織深度成像的主要因素，盡管目前出現(xiàn)許多旨在降低組織光散射的組織透明技術(shù)，但是這些技術(shù)或多或少存在技術(shù)缺陷而需要進(jìn)一步改進(jìn)。2013年報(bào)道的CLARITY技術(shù)則是一種全新的組織透明技術(shù)，和傳統(tǒng)技術(shù)存在本質(zhì)區(qū)別。這項(xiàng)技術(shù)首次將大腦組織轉(zhuǎn)變成水凝膠結(jié)構(gòu)并去除腦內(nèi)脂質(zhì)而使腦組織變透明，去除脂質(zhì)能夠降低光散射從而提高腦成像深度，同時(shí)大分子抗體標(biāo)記物也更容易進(jìn)入組織內(nèi)部。CLARITY技術(shù)自被報(bào)道以來就以其顯著的優(yōu)勢吸引

2、著世界各地課題組對它進(jìn)行完善改進(jìn)，另外，最近兩年CLARITY技術(shù)已被成功應(yīng)用于各類神經(jīng)疾病的高精度成像研究。
　　本文主要分為兩部分進(jìn)行。第一部分進(jìn)行了CLARITY技術(shù)一系列的摸索及優(yōu)化工作，包括CLARITY技術(shù)必須的電泳裝置的構(gòu)建、電泳條件如溫度、水凝膠溶液配比以及光折射率匹配溶液的優(yōu)化等，并通過紫外分光光度計(jì)及BCA法分別測量了不同的條件下所獲得的透明腦的透明度以及蛋白損失率，通過相關(guān)數(shù)據(jù)分析得到最優(yōu)的CLARITY技術(shù)

3、條件，最后開展免疫染色及共聚焦成像研究得到了一些14-3-3zeta蛋白的三維結(jié)構(gòu)信息。
　　接下來將CLARITY技術(shù)其應(yīng)用于顳葉癲癇的成像研究。通過構(gòu)建癲癇鼠模型并采用Timm染色法驗(yàn)證成功獲得了顳葉癲癇模型，之后采用CLARITY技術(shù)透明了包含完整海馬約3mm厚的小鼠腦切片并開展免疫染色及共聚焦成像，獲取了14-3-3zeta蛋白和S262位點(diǎn)磷酸化Tau蛋白在癲癇小鼠海馬CA1、CA3區(qū)的空間共定位信息，上述這些研究工作為