miR-29b對與A549細(xì)胞共培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞抗纖維化作用的研究.pdf

1、目的：
　　特發(fā)性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是一種慢性進(jìn)展性的病因不明的肺部疾病，且缺乏有效的治療手段。過多的肺成纖維細(xì)胞、肌成纖維細(xì)胞聚集和細(xì)胞外基質(zhì)的過度沉積是IPF的重要病理特點(diǎn)。microRNA是一種小分子非編碼的RNA，在體內(nèi)眾多生理病理過程中扮演重要的角色。研究表明microRNA同樣參與IPF的發(fā)病機(jī)理。本研究通過觀察miR-29b對與A549細(xì)胞共培養(yǎng)的人胚肺成纖

2、維細(xì)胞（MRC-5）合成I型膠原蛋白（Collagen I，Col I）的影響，探討其在抗肺纖維化中的作用，為探尋IPF新的治療靶點(diǎn)提供一定的研究依據(jù)。
　　方法：
　　應(yīng)用Transwell小室構(gòu)建MRC-5與A549細(xì)胞跨室共培養(yǎng)模型，利用脂質(zhì)體介導(dǎo)法將miR-29b轉(zhuǎn)染至MRC-5細(xì)胞以及使用TGF-β1刺激相應(yīng)細(xì)胞組，并設(shè)空白對照組，TGF-β1刺激組，miR-29b陰性轉(zhuǎn)染對照+TGF-β1刺激組，miR-29b轉(zhuǎn)

3、染+TGF-β1刺激組，miR-29b轉(zhuǎn)染組。通過實(shí)時定量PCR法檢測各組細(xì)胞中Col I和miR-29b的mRNA相對表達(dá)水平。Western blotting法檢測各組細(xì)胞中Col I蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　（1）PCR檢測分析顯示，與空白對照組相比，miR-29b在轉(zhuǎn)染組表達(dá)水平增加了127倍（P<0.01），使用Lipofectamin2000在MRC-5細(xì)胞轉(zhuǎn)染組中過表達(dá)miR-29b成功。
　　（2

4、）通過PCR檢測分析顯示與TGF-β1刺激組和miR-29b陰性轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組相比，miR-29b轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組中Col I表達(dá)降低（P<0.05）。
　　（3）Western blotting法檢測各組細(xì)胞Col I蛋白表達(dá)，miR-29b轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組中Col I表達(dá)較TGF-β1刺激組和miR-29b陰性轉(zhuǎn)染+TGF-β1刺激組相比表達(dá)降低（P<0.05）
　　結(jié)論：
　　實(shí)驗(yàn)表明在