干細(xì)胞治療宮腔粘連抗纖維化作用機(jī)制的探索.pdf

1、目的：
　　評(píng)估人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（UCMSC）、輸卵管內(nèi)膜干細(xì)胞（FMMSC）和子宮內(nèi)膜干細(xì)胞（EnMSC）的抗纖維化作用潛能，初步探索干細(xì)胞治療宮腔粘連抗纖維化的作用機(jī)制，尋求一種更好的干細(xì)胞用于宮腔粘連抗纖維化的治療。
　　方法：
　　體外分離、培養(yǎng)及鑒定人UCMSC、EnMSC和FMMSC，倒置顯微鏡觀察其細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞表型分析和周期測(cè)定，平板細(xì)胞克隆形成試驗(yàn)檢測(cè)其增殖能力，CCK-8法判斷其生長(zhǎng)

2、特性，核型分析檢測(cè)其遺傳穩(wěn)定性，體外誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)證明其多向分化潛能，Real Time PCR方法檢測(cè)UCMSC、EnMSC和FMMSC抗纖維化相關(guān)蛋白相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1.三種不同組織來(lái)源的細(xì)胞接種于MSC完全培養(yǎng)基后，約12h即見(jiàn)貼壁細(xì)胞，培養(yǎng)至5d時(shí)，細(xì)胞融合達(dá)80％左右，所有細(xì)胞傳至P5代，倒置顯微鏡下觀察，表現(xiàn)為均一長(zhǎng)梭形，并呈漩渦狀生長(zhǎng)，UC來(lái)源的細(xì)胞形態(tài)更為均一，細(xì)長(zhǎng)，并且排列緊密，F(xiàn)M和En來(lái)源細(xì)

3、胞形態(tài)立體感更強(qiáng)，二者形態(tài)更為相似。
　　2.三種MSC均陽(yáng)性表達(dá)CD90、CD73、CD105、CD29、CD44、CD166和HLA-ABC，陰性表達(dá)CD14、CD19、CD45、CD34和HLA-DR。
　　3.細(xì)胞周期檢測(cè)結(jié)果顯示，F(xiàn)MMSC中處于DNA合成期（G2+S期）的細(xì)胞比例高于UCMSC和EnMSC。
　　4.平板細(xì)胞克隆形成試驗(yàn)結(jié)果顯示，UCMSC形成的克隆團(tuán)為136±26.32個(gè)， FMMSC形成

4、的克隆團(tuán)為89±5.34個(gè)，EnMSC形成的克隆團(tuán)為91.6±2.7個(gè)，克隆形成率分別為136%±26.32%、89%±5.34%、91.6%±2.7%。UCMSC和FMMSC、UCMSC和 EnMSC克隆團(tuán)數(shù)目及克隆形成率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），F(xiàn)MMSC和EnMSC克隆團(tuán)數(shù)目及克隆形成率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.三種細(xì)胞增殖曲線均呈S型。UCMSC潛伏時(shí)間較短，于24h左右即進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。FMMSC于4-6d進(jìn)入

5、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后生長(zhǎng)快速，于7-8d進(jìn)入平臺(tái)期。
　　6.核型結(jié)果符合樣本來(lái)源，此方法所培養(yǎng)的細(xì)胞具有遺傳穩(wěn)定性。
　　7.三種干細(xì)胞在體外均具有成脂、成骨和成軟骨誘導(dǎo)分化的能力。
　　8.抗纖維化相關(guān)蛋白mRNA表達(dá)結(jié)果顯示，F(xiàn)MMSC和EnMSC分泌的HGF、IL-10和IFN-γ均高于UCMSC（P<0.05），而FMMSC和EnMSC分泌HGF、IL-10和IFN-γ無(wú)差別。三組干細(xì)胞分泌bFGF、Adrenome

6、dullin和lefty無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但根據(jù)數(shù)值目測(cè)應(yīng)該是有差異的，目測(cè)FMMSC和EnMSC分泌的bFGF相對(duì)表達(dá)量多于UCMSC，EnMSC分泌的Adrenomedullin顯著多于FMMSC和EnMSC，F(xiàn)MMSC分泌的lefty多于EnMSC，EnMSC分泌的lefty多于UCMSC。
　　結(jié)論：
　　1.UCMSC的增殖能力高于FMMSC和EnMSC，但FMMSC的增殖速度較快；
　　2.FMMSC和EnMS

7、C生物學(xué)特性高度相似；
　　3.UCMSC、FMMSC和EnMSC均分泌抗纖維化相關(guān)蛋白；
　　4.FMMSC和EnMSC在抗纖維化作用中，HGF、IL-10和IFN-γ發(fā)揮的比重可能要多于bFGF、Adrenomedullin和lefty，其可能主要通過(guò)HGF、IL-10和IFN-γ參與的通路來(lái)發(fā)揮抗纖維化作用。
　　5.對(duì)于缺失EnMSC的患者，F(xiàn)MMSC可實(shí)現(xiàn)MSC的自體移植。在自體移植方面，UCMSC和FMMS