2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究背景和目的:
  原發(fā)性肝癌是世界范圍內(nèi)第五大常見的惡性腫瘤,死亡率極高,嚴(yán)重威脅了人類的健康。我國的肝癌患者占世界的一半以上,且80%的患者處于中晚期,預(yù)后差。肝癌的主要致死原因是侵襲和轉(zhuǎn)移,而在肝癌的遠(yuǎn)隔轉(zhuǎn)移中,肺轉(zhuǎn)移占主要部分?!胺N子-土壤”學(xué)說認(rèn)為,腫瘤的轉(zhuǎn)移過程與腫瘤微環(huán)境關(guān)系密切。因此,進(jìn)一步深入研究肝癌微環(huán)境對肝癌肺轉(zhuǎn)移的影響,對臨床靶向肺轉(zhuǎn)移的預(yù)防和治療具有潛在的重要意義。
  腫瘤微環(huán)境是指腫瘤發(fā)生發(fā)展

2、過程中所處的內(nèi)環(huán)境,包括腫瘤細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、免疫細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和多種細(xì)胞因子等成分。腫瘤細(xì)胞與微環(huán)境中非腫瘤細(xì)胞之間的交互作用,是腫瘤細(xì)胞調(diào)控腫瘤微環(huán)境的重要過程,對腫瘤細(xì)胞的生存和發(fā)展有著極其重要的意義。在非腫瘤細(xì)胞中,成纖維細(xì)胞是主要成分,其活化形式即腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞,能夠?yàn)槟[瘤生長提供營養(yǎng)支持和多種活性因子,參與腫瘤的增殖、侵襲轉(zhuǎn)移和耐藥等多個(gè)方面的調(diào)控。在腫瘤微環(huán)境中,除了細(xì)胞因子發(fā)揮作用之外,外泌體作為重要的信息媒介,成為

3、近年來研究的熱點(diǎn)。外泌體是細(xì)胞生成的一種直徑在30到100納米的囊泡,其內(nèi)包含有多種核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等物質(zhì),是介導(dǎo)腫瘤微環(huán)境中多種細(xì)胞之間生物信息交流的重要介質(zhì),在腫瘤的轉(zhuǎn)移、耐藥等方面發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。
  然而,在肝癌肺轉(zhuǎn)移過程中,肝癌細(xì)胞如何調(diào)控腫瘤微環(huán)境以促進(jìn)肺轉(zhuǎn)移形成,目前尚不清楚。尤其是肝癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞之間交互作用對肺轉(zhuǎn)移形成的影響,以及肝癌微環(huán)境中外泌體對介導(dǎo)肝癌肺轉(zhuǎn)移過程的影響均無系統(tǒng)研究闡明。并且,肝癌

4、細(xì)胞在肺轉(zhuǎn)移形成能力上存在較大異質(zhì)性,這一點(diǎn)是否與肝癌細(xì)胞對微環(huán)境特別是成纖維細(xì)胞的教化能力不同有關(guān),亦缺少相關(guān)研究證實(shí)。因此,深入研究肝癌細(xì)胞對微環(huán)境中成纖維細(xì)胞的調(diào)控及其機(jī)制,對理解肝癌肺轉(zhuǎn)移異質(zhì)性,在臨床治療及預(yù)后判斷方面具有重要價(jià)值。
  本研究基于肝癌肺轉(zhuǎn)移存在異質(zhì)性這一現(xiàn)象,系統(tǒng)研究了不同轉(zhuǎn)移能力的肝癌細(xì)胞對成纖維細(xì)胞的教化能力差異,提出了高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞與成纖維細(xì)胞交互作用的具體機(jī)制。本研究將有助于進(jìn)一步理解肝癌肺轉(zhuǎn)移

5、的具體過程,為臨床肝癌肺轉(zhuǎn)移的預(yù)防和治療提供新的思路。
  研究方法:
  1、選取常見四種肝癌細(xì)胞并通過尾靜脈注射建立體內(nèi)肺轉(zhuǎn)移模型,根據(jù)肺轉(zhuǎn)移形成能力高低,分為高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞和低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞;
  2、在體外,收集肝癌細(xì)胞條件培養(yǎng)基及外泌體,分別刺激人胚肺成纖維細(xì)胞,比較轉(zhuǎn)移能力差異對成纖維細(xì)胞招募及激活能力差異的影響,以及外泌體在肝癌細(xì)胞教化成纖維細(xì)胞過程的作用;
  3、通過尾靜脈注射建立肝癌細(xì)胞SMMC

6、-7721的肺轉(zhuǎn)移模型,隨機(jī)分組后分別給予所選四種肝癌細(xì)胞的外泌體及對照處理,比較不同轉(zhuǎn)移能力肝癌細(xì)胞來源的外泌體對肝癌肺轉(zhuǎn)移的影響;
  4、通過收集所選四種肝癌細(xì)胞的外泌體并進(jìn)行miRNA芯片測試,分析其表達(dá)差異并結(jié)合功能實(shí)驗(yàn)篩選高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞教化成纖維細(xì)胞過程中的關(guān)鍵miRNA;
  5、通過miRNA靶點(diǎn)預(yù)測并結(jié)合功能實(shí)驗(yàn),篩選上述關(guān)鍵miRNA在成纖維細(xì)胞中發(fā)揮活化作用的直接靶點(diǎn);
  6、通過蛋白免疫印跡技

7、術(shù)及報(bào)告基因?qū)嶒?yàn),進(jìn)一步研究該miRNA在成纖維細(xì)胞中發(fā)揮作用的主要信號通路;
  7、通過建立腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞體外誘導(dǎo)模型,研究其對肝癌細(xì)胞干性、EMT及腫瘤生長的影響;
  8、通過分離培養(yǎng)原代腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞,研究其對肝癌細(xì)胞干性、EMT及腫瘤生長的影響;
  9、收集臨床肝癌組織及血清樣本,檢測上述miRNA的臨床樣本中的表達(dá)情況及對臨床預(yù)后的相關(guān)性,分析血清外泌體中該miRNA的表達(dá)與肝癌肺轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

8、
  結(jié)果:
  1、高轉(zhuǎn)移能力的肝癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的招募及活化成纖維細(xì)胞以促進(jìn)肝癌肺轉(zhuǎn)移的能力;
  2、高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞來源的外泌體具有更強(qiáng)的招募及活化成纖維細(xì)胞的能力,繼而促進(jìn)肺轉(zhuǎn)移的形成;
  3、高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞生成含有miR-1247-3p的外泌體介導(dǎo)了肺轉(zhuǎn)移微環(huán)境中的正常成纖維細(xì)胞的活化;
  4、β1,4亞基半乳糖轉(zhuǎn)移酶3是腫瘤細(xì)胞教化成纖維細(xì)胞過程中miR-1247-3p的直接作用靶點(diǎn);

9、  5、miR-1247-3p通過靶向β1,4亞基半乳糖轉(zhuǎn)移酶3,繼而上調(diào)β1型整合素-NF-κB信號通路,以激活成纖維細(xì)胞;
  6、活化后的成纖維細(xì)胞中IL-6和IL-8分泌能力增強(qiáng),促進(jìn)肝癌細(xì)胞的干性、EMT和腫瘤生長;
  7、血清外泌體中miR-1247-3p的表達(dá)與肝癌肺轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)關(guān)系。
  結(jié)論:
  本研究通過不同轉(zhuǎn)移能力肝癌細(xì)胞對成纖維細(xì)胞的教化實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的招募并激活成纖

10、維細(xì)胞的能力。具體機(jī)制為,高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞能特異性生成含有大量miR-1247-3p的外泌體,后者被成纖維細(xì)胞攝取后,miR-1247-3p通過靶向β1,4亞基半乳糖轉(zhuǎn)移酶3,進(jìn)而上調(diào)β1型整合素-NF-κB信號通路,從而激活成纖維細(xì)胞?;罨蟮哪[瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞中IL-6和IL-8分泌能力增強(qiáng),促進(jìn)肝癌細(xì)胞的干性、EMT及腫瘤生長。在臨床肝癌患者的血清外泌體樣本中,miR-1247-3p的表達(dá)與肝癌肺轉(zhuǎn)移具有正相關(guān)關(guān)系。本研究證實(shí)了,在

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