成纖維細(xì)胞與肺癌GLC-82細(xì)胞相互作用對MMP-1，2，9的影響.pdf

1、目的:
　　 研究胚肺成纖維細(xì)胞與肺癌細(xì)胞在膠原三維立體培養(yǎng)條件下，相互作用對基質(zhì)金屬蛋白酶-1、2、9(MMP-1、2、9)表達(dá)的影響。
　　 方法:
　　 采用三維膠原立體培養(yǎng)模型，將肺癌GLC-82細(xì)胞、胚肺成纖維細(xì)胞(HFL)分別單獨培養(yǎng)，及GLC-82細(xì)胞和胚肺成纖維細(xì)胞按5∶1混合培養(yǎng)，48 h后收集上清液。Western blot法檢測MMP-1表達(dá)水平，明膠酶譜法測定MMP-2、9的表達(dá)。

2、　　 結(jié)果:
　　 細(xì)胞生長情況觀察三維膠原立體培養(yǎng)中，HFL細(xì)胞和GLC-82細(xì)胞均懸浮生長于膠原中(圖1A)，細(xì)胞在膠原內(nèi)幾乎不分裂，呈單細(xì)胞生長。如：HFL細(xì)胞在膠原內(nèi)呈長條狀生長，GLC-82細(xì)胞呈毛刺樣浸潤生長。
　　 明膠酶普法檢測MMP-2、9的表達(dá)應(yīng)用蛋白累積光密度值(integratedoptical density，IOD)半定量檢測MMP-2、9的表達(dá)情況，GLC-82細(xì)胞培養(yǎng)組及HFL細(xì)胞培養(yǎng)組

3、不表達(dá)或表達(dá)極少量MMP-9，混合培養(yǎng)組MMP-9表達(dá)明顯增高；混合培養(yǎng)組proMMP-2表達(dá)較GLC-82細(xì)胞組(P=0.000＜0.05)、HFL細(xì)胞組(P=0.001＜0.05)表達(dá)明顯增高，HFL細(xì)胞組proMMP-2達(dá)較高于GLC-82細(xì)胞組(P=0.000＜0.05)；GLC-82細(xì)胞培養(yǎng)組不表達(dá)(或少量)MMP-2，但混合培養(yǎng)組MMP-2表達(dá)明顯高于GLC-82細(xì)胞組(P=0.000＜0.05)及HFL細(xì)胞組(P=0.00

4、0＜0.05)。
　　 Western blot檢測MMP-1的表達(dá)采用MMP-1蛋白條帶的I0D值/對應(yīng)的β-actin I0D值，半定量比較各組MMP-1的表達(dá)。混合培養(yǎng)組MMP-1表達(dá)較GLC-82細(xì)胞培養(yǎng)組(P=0.000＜0.05)及HFL細(xì)胞培養(yǎng)組(P=0.000＜0.05)表達(dá)明顯增高；GLC-82細(xì)胞組MMP-1表達(dá)高于HFL細(xì)胞組(P=0.027＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 HFL細(xì)胞與肺