MscL表達純化及其寡聚態(tài)的質(zhì)譜解析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、高電荷機械敏感性離子通道(the Mechanosensitive channel of Large conductance，MscL)是生物膜離子通道中一種重要的膜蛋白，MscL作為一種能量釋放閥可以在一定程度上防止細胞因滲透壓的劇烈變化而裂解。關(guān)于這種膜蛋白的研究熱點很多，MscL通道直徑大小，生理功能以及不同實驗方法得到的關(guān)于其低聚物形態(tài)不一致的觀點。本研究主要研究MscL蛋白的低聚物形態(tài)問題，要想探究這個問題首先要做的是分子克隆

2、將MscL基因片段插入到pET-28載體再做轉(zhuǎn)化。其次使用IPTG誘導(dǎo)表達，優(yōu)化表達條件后進行大量表達。對得到的菌體進行破碎，分離出脂溶性蛋白后使用AKTA系統(tǒng)進行純化，得到很高純度的MscL蛋白后做質(zhì)譜分析。由于膜蛋白是脂溶性蛋白并且難結(jié)晶，所以在純化和分析過程中添加表面活性劑DDM溶解膜蛋白，利用非變性質(zhì)譜的高靈敏度的特點克服膜蛋白難結(jié)晶的困難。最后通過質(zhì)譜檢測MscL蛋白的低聚物形態(tài)。為了高效表達和得到更好的質(zhì)譜信號，在本實驗中還

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