靈芪菌質(zhì)活性多糖的分離純化及其結(jié)構(gòu)表征.pdf

1、靈芪菌質(zhì)是以靈芝為發(fā)酵菌種，黃芪為藥性基質(zhì)，添加農(nóng)副產(chǎn)品為營養(yǎng)基質(zhì)，經(jīng)過固體發(fā)酵得到的藥性菌質(zhì)。研究表明經(jīng)過微生物的轉(zhuǎn)化作用，黃芪的抗病毒活性提高顯著，且毒副作用有所降低。但目前就靈芪菌質(zhì)的研究僅限于發(fā)酵條件優(yōu)化及活性成分的提取，對于功能成分的純化及結(jié)構(gòu)研究尚屬空白。多糖類是靈芪菌質(zhì)的主要活性成分，具有突出的免疫增強(qiáng)、抗病毒及抗氧化活性，本論文以靈芪菌質(zhì)為原料，利用現(xiàn)代分離分析手段，對靈芪菌質(zhì)多糖的分離純化、多糖的抗病毒活性和活性多糖的

2、結(jié)構(gòu)鑒定進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究。
　　 研究結(jié)果如下：
　　 1.按照已經(jīng)確定的提取工藝提取靈芪菌質(zhì)多糖，得率為2.84％，粗多糖中的總糖含量為45.8％，蛋白含量為19.2％。
　　 2.使用乙醇分級沉淀分離靈芪菌質(zhì)多糖，以20％、40％、60％、80％濃度乙醇依次沉淀獲得的多糖為醇沉多糖A、B、C、D，各組分多糖得率分別為7.6％、19.3％、31.3％、33.6％；總糖含量分別為55.6％、51.6％、40.

3、3％、39.2％；蛋白含量分別為11.6％、12.3％、20.5％、21.6％。
　　 3.對醇沉多糖A、B、C、D采用離子交換層析進(jìn)一步純化，得到8個多糖組分，其中包括3個糖肽類物質(zhì)。凝膠柱層析法和比旋光度法純度鑒定表明上述8個組分均為單一多糖。
　　 4.使用了雞胚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)對醇沉多糖A、B、C、D及8個純多糖的抗病毒活性進(jìn)行評價。在考察安全濃度的基礎(chǔ)上測定了上述多糖組分抗禽流感減毒病毒活性。結(jié)果表明，經(jīng)過分級醇

4、沉多糖B、C、D具有較好的抗病毒活性，對禽流感減毒病毒的最高抑制率分別為：58.65％、65.80％、38.11％；經(jīng)過離子交換層析純化的糖肽C2具有較強(qiáng)的抑制禽流感減毒病毒活性，與病毒感作后加入細(xì)胞，可以避免病毒對細(xì)胞的毒害，抑制率達(dá)到75.41％。
　　 5.對糖肽C2的結(jié)構(gòu)進(jìn)行表征，經(jīng)凝膠過濾色譜檢測其峰值分子量為1.7×104D，數(shù)均分子量為1.2×104D，重均分子量為4.9×104D；氣相色譜分析，其單糖組成的摩爾百

5、分比為：n(Ara)：n(Xyl)：n(Man)：n(Glc)：n(Gal)＝2.56:1.85：6.36:1:0.59；使用氨基酸分析儀測定其結(jié)合氨基酸組成，結(jié)果表明C2含有15種氨基酸，其中包括7種必需氨基酸和8種非必需氨基酸，其中天冬氨酸和谷氨酸含量最高，分別占氨基酸總量的14.66％、22.58％；經(jīng)紅外光譜和NMR分析分析，糖肽C2為α-糖苷鍵連接的吡喃多糖，取代主要發(fā)生在C-6上，C-2、C-3、C-4也有部分取代。