半枝蓮多糖的分離純化及其活性初步研究.pdf

1、半枝蓮，為唇形科植物半枝蓮(Scutellaria barbata D. Don)的干燥全草，其主要活性成分為黃酮類化合物和二萜類化合物。研究表明，半枝蓮具有抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、護(hù)肝、解熱和利尿等作用，臨床常以復(fù)方治療各種癌癥、乙型肝炎和毒蛇咬傷等疾病，療效確切。目前對(duì)半枝蓮的研究主要集中在其黃酮類成分的研究，而對(duì)半枝蓮多糖的研究較少。多糖是一重要的活性成分，具有重要的研究和開發(fā)價(jià)值，已成為天然藥物研究的一個(gè)熱點(diǎn)。本論文以我國江蘇產(chǎn)

2、半枝蓮藥材為原料，研究半枝蓮多糖的提取和純化工藝、半枝蓮多糖的免疫活性、抗腫瘤以及抗氧化活性，為半枝蓮多糖功能食品及新藥的開發(fā)提供基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1.研究了半枝蓮多糖的水提工藝條件。以半枝蓮多糖的得率為考察指標(biāo)，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)法優(yōu)選了提取工藝，最佳提取工藝條件為：提取溫度90℃、時(shí)間3h、固液比1:12和提取次數(shù)3次。該工藝條件下，半枝蓮粗多糖的得率為2.90％，粗多糖中多糖

3、含量為30.42％。該工藝可用于半枝蓮粗多糖的提取。
　　 2.研究了半枝蓮多糖的分離純化工藝。半枝蓮多糖經(jīng)脫蛋白、脫色、透析及DEAE-52柱層析純化后，得到四個(gè)精制多糖組分SBP-11,SBP-12,SBP-13和SBP-14，多糖含量分別為90.24％,88.56％,86.42％和85.23％。HPLC法測(cè)得四個(gè)多糖組分的分子量分別約為18000、65000、639000和1007000。采用氣相色譜法測(cè)定了四個(gè)多糖組分的

4、單糖組成。結(jié)果表明：SBP-11由鼠李糖、木糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為1:0.21∶0.38∶0.52∶0.78。SBP-12由鼠李糖、阿拉伯糖、葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為0.71∶0.81∶1∶0.91。SBP-13由未知、鼠李糖、木糖、葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為0.14∶0.31∶0.28∶0.21∶1，色譜圖中有一個(gè)未知峰有待進(jìn)一步確定。SBP-14由鼠李糖、木糖、葡萄糖和半乳糖組成，其摩爾比為1∶0.1

5、5∶0.24∶0.96。
　　 3.研究了半枝蓮多糖的體內(nèi)免疫活性。半枝蓮粗多糖(SBP-1)在100mg/kg、300mg/kg下對(duì)免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能均未見明顯增強(qiáng)效果；在劑量300mg/kg下，能提高免疫抑制小鼠血清溶血素水平(p＜0.01)；在100mg/kg、300mg/kg下，對(duì)免疫抑制小鼠胸腺系數(shù)均未見明顯增強(qiáng)效果，而能增強(qiáng)免疫抑制小鼠脾臟系數(shù)(P＜0.05或p＜0.01)。半枝蓮未脫蛋白粗多糖(SB

6、P-2)在100mg/kg、300mg/kg下對(duì)免疫抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能均未見明顯增強(qiáng)效果；在劑量300mg/kg下，能提高免疫抑制小鼠血清溶血素水平(p＜0.01)；在100mg/kg、300mg/kg下，對(duì)免疫抑制小鼠胸腺系數(shù)均未見明顯增強(qiáng)效果，而能增強(qiáng)免疫抑制小鼠脾臟系數(shù)(P＜0.05或p＜0.001)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明半枝蓮粗多糖具有一定的免疫增強(qiáng)活性，與是否脫蛋白無關(guān)。
　　 4.采用MTT法研究了半枝蓮多糖的體

7、外抗腫瘤活性。半枝蓮粗多糖(SBP-1)及精制多糖(SBP-12)對(duì)人胃癌細(xì)胞(AGS)表現(xiàn)出一定的抑制作用，純化后抑制作用有一定的增強(qiáng)。半枝蓮粗多糖(SBP-1)及精制多糖(SBP-12)對(duì)人胃癌細(xì)胞(SGC)表現(xiàn)出一定的抑制作用，中等劑量(160μg/mL)抑制作用較強(qiáng)，純化后抑制作用減弱。半枝蓮粗多糖(SBP-1)及精制多糖(SBP-12)對(duì)人血癌細(xì)胞(U937)均表現(xiàn)出小劑量抑制生長、大劑量促進(jìn)生長和純化后抑制作用減弱的現(xiàn)象。<