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文檔簡介
1、天然產(chǎn)物始終是新藥的源泉,海洋微藻作為初級生產(chǎn)者和海洋生物的主體,在海洋生態(tài)系統(tǒng)的物質(zhì)和能量循環(huán)中起著重要作用,而其獨(dú)特的生存環(huán)境,為微藻產(chǎn)生功能獨(dú)特的代謝物提供了溫床。隨著微藻中具有生物活性的物質(zhì)越來越多的被發(fā)現(xiàn),微藻活性物質(zhì)的成為研究熱點(diǎn)。因此,海洋微藻將成為新藥開發(fā)的巨大潛在資源。
聚球藻(Synechococcus)屬于藍(lán)藻門(Cyanobacteria)的一種微藻,在其生長期間能夠合成大量功能性的次級代謝產(chǎn)物,本文以
2、聚球藻(Synechococcussp.)作為實(shí)驗(yàn)材料乙醇抽提獲得浸膏,其后分別采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取獲得不同極性的萃取物,并對三種溶劑萃取物進(jìn)行成分和活性追蹤研究,根據(jù)研究結(jié)果進(jìn)一步對活性較好的組分進(jìn)行分離純化,獲得兩種單體化合物,并進(jìn)一步鑒定了化合物分子結(jié)構(gòu)。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
(1)對冷凍干燥后的聚球藻藻粉成分進(jìn)行分析,結(jié)果顯示聚球藻中含灰分18.4%,粗蛋白12.3%,粗脂肪16.2%,粗纖維5.9%,水分和
3、碳水化合物分別為35.7%和11.5%。聚球藻中脂肪含量在微藻中相對較高,具有較大的潛在開發(fā)利用價值。
(2)冷凍干燥后的聚球藻藻粉分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇三種極性不同的溶劑提取,結(jié)果顯示聚球藻中低極性組分物質(zhì)含量較多,中極性組分含量最少。同時對各相粗提物進(jìn)行GC-MS聯(lián)用分析后發(fā)現(xiàn),石油醚相和正丁醇相中各含20種成分。石油醚相包括酯類、酸類、醇類和碳烯類,其中酸類物質(zhì)含量最多,占69.9%;其余含量依次為酯類,碳烯類,
4、醇類。正丁醇相中包括酸類、烷烴類、酯類、酮類和醇類,其中酯類含量高達(dá)40.5%,其余含量依次為醇類,酸類,烷烴類,和酮類。
(3)對三相粗提物進(jìn)行抗菌抗氧化活性檢測,確定活性組分,便于進(jìn)一步分離。粗品中石油醚相的抗菌能力優(yōu)于乙酸乙酯和正丁醇相,其DPPH自由基清除率的IC50值為235.59μg/mL,小于乙酸乙酯相的286.20μg/mL和正丁醇相的321.77μg/mL,說明石油醚相的抗氧化能力較強(qiáng),因此,對石油醚相進(jìn)行后
5、續(xù)進(jìn)一步分離。
(4)石油醚相進(jìn)一步分離得到G1、G2和G3三個組分,DPPH自由基清除活性追蹤顯示,G3組分活性較弱,G1和G2組分的半數(shù)清除率濃度IC50分別為292.76μg/mL和346.76μg/mL。因此對G1和G2組分繼續(xù)純化,從G1中得到H1和H2兩個組分,從G2中得到N1、N2和N3三個組分?;钚苑治鼋Y(jié)果進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)H1和N1的清除效果較好,其IC50值分別為302.82μg/mL和346.85μg/mL,其它
6、幾個組分活性較弱。
(5)采用凝膠SephadexLH-20柱層析色譜進(jìn)一步對H1和N1兩個組分進(jìn)行分離純化,最終得到兩個單體化合物S1和S2。經(jīng)核磁共振譜鑒定確定S1為β-谷甾醇,S2為胡蘿卜苷。
(6)對β-谷甾醇和胡蘿卜苷兩種單體化合物的抗菌活性和抗氧化活性進(jìn)行檢測??咕钚越Y(jié)果顯示β-谷甾醇對革蘭氏陽性菌和陰性菌均有一定的抑制作用,其中對金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的最小抑菌濃度分別為7.5mg/ml和3.7mg
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