多管藻藻膽體中R-藻紅蛋白和R-藻藍蛋白的光譜和結構特性.pdf

1、本研究用900 mmol/L的磷酸緩沖液(pH 7.0)從海生紅藻多管藻中提取藻膽體，加入終濃度為2％(v/v)的NP-40 增溶后用蔗糖密度梯度離心制備完整藻膽體。將SepharoseCL-4B/Sephadex G-150分子篩層析與DEAE-Sepharose FF 離子交換層析及非變性PAGE(Native-PAGE) 順序相結合，從解離藻膽體中成功分離、純化制備出一種R-PE和一種R-PC。所制備的R-PE在497nm、538

2、 nm和566 nm 有三個吸收峰，在576 nm 有一個熒光發(fā)射峰；純化R-PC的兩個吸收峰分別位于549 nm和617nm，一個熒光發(fā)射峰位于636nm。純化制備的R-PE和R-PC在中性pH、非變性PAGE(Native-PAGE)中均表現(xiàn)為單一條帶。用Superdex-200分子篩層析進行的分子大小分析表明R-PE 為240 kDa，R-PC 為136 kDa；這一結果證明R-PE是六聚體，R-PC是三聚體。然而在非變性IEF分

3、析中R-PE在pH 4.7處被分離為pI 很接近的兩條帶，R-PC在pH 5.7處被分離為pI 非常接近的兩條帶。這一結果揭示純化制備的R-PE中有兩種不同形式的六聚體，而R-PC 以兩種三聚體形式存在；兩種不同形式的六聚體和三聚體在Superdex-200分子篩層析表現(xiàn)均一的分子大小，在Native-PAGE中表現(xiàn)出均一的荷質比。
　　 SDS-PAGE、變性IEF(Denaturing-IEF)及二維PAGE(2D-PAGE

4、)分析表明：純化制備的R-PE 由α17.3、β19.5、γ33.3和γ′31.0四種亞基組成，其比例為α17.3：β19.5：γ′31.0: γ33.3=6: 6:1: 2；α17.3的pI 為5.0，β19.5的pI 為5.8，γ′31.0: γ33.3的pI位于5.0-5.8之間。純化制備的R-PC 由α17.5，β21.3和β′22.3三種亞基組成，其pI分別位于6.4、5.3和5.4。根據(jù)亞基特性，最可能的兩種形式三聚體R-P

5、C 為(α17.53β21.3 2β22.6 1)和(α17.53 β21.3 1β22.6 2)，兩者之間有最小的分子大小、荷質比及pI 差異。對于純化制備的R-PE，最可能的兩種形式六聚體為γ(αβ)3-γ-(αβ)3γ′和γ(αβ)3-γ′-(αβ)3γ。每個六聚體含有至少兩個γ亞基(兩個γ或一個γ和一個γ′) 揭示在藻膽體“桿”(rod) 結構域(domain)中每增加一個(αβ)3 R-PE 三聚體便有一個γ或γ′將它連接于桿