參考教案-藻藍(lán)蛋白-血紅蛋白

1、1模塊I：生物大分子制備方案設(shè)計(jì)與實(shí)踐研究：生物大分子制備方案設(shè)計(jì)與實(shí)踐研究一、教學(xué)要求一、教學(xué)要求1掌握生物分離科學(xué)的進(jìn)展、相關(guān)項(xiàng)單元操作技術(shù)的基本原理。2.掌握實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的基本原則，學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)的基本方法。3熟練地實(shí)施設(shè)計(jì)方案，優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。4掌握所學(xué)技術(shù)、方法在生物學(xué)研究中的應(yīng)用。5.掌握實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)與處理，學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)圖表的制作方法以及實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析討論二、教學(xué)學(xué)時(shí)二、教學(xué)學(xué)時(shí)計(jì)劃課內(nèi)64學(xué)時(shí)，其中講授8學(xué)時(shí)、實(shí)驗(yàn)研究56學(xué)時(shí)

2、。計(jì)劃課外16學(xué)時(shí)，其中文獻(xiàn)綜述10學(xué)時(shí)、以小組為單位答疑2學(xué)時(shí)，集中論文交流4學(xué)時(shí)）三、講授的內(nèi)容三、講授的內(nèi)容1蛋白質(zhì)研究在生物科學(xué)學(xué)習(xí)和研究中的地位，進(jìn)展。2蛋白質(zhì)制備的基本思路和原則。3各實(shí)驗(yàn)的基本原理，操作步驟和注意事項(xiàng)。4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法和要求，5在本模塊基礎(chǔ)上開(kāi)展蛋白質(zhì)研究的思路和常用技術(shù)、方法。6.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)施的基本的基本要求、注意事項(xiàng)。四、研究課題四、研究課題1、蛋白質(zhì)的提取純化與鑒定（藻藍(lán)蛋白、血紅蛋白）2、多

3、糖的提取與分析（酵母、紫色甘薯、南瓜）3、脂類的提取、純化與分析（胡蘿卜素）4、色素的分離純化與分析（花青素）5、自選課題（根據(jù)科研課題、實(shí)驗(yàn)條件、自己的興趣）五、主要單元操作技術(shù)與設(shè)備五、主要單元操作技術(shù)與設(shè)備1、單元操作技術(shù)：細(xì)胞組織破碎術(shù)、離心分離技術(shù)、雙水相萃取技術(shù)、離子交換層析技術(shù)、凝膠層析技術(shù)、超濾技術(shù)、減壓蒸餾技術(shù)、冷凍干燥技術(shù)、分光光度技術(shù)、電泳技術(shù)等生物分離技術(shù)；2、主要設(shè)備：烘箱、真空干燥箱、分析天平、電子臺(tái)秤、超聲

4、波細(xì)胞破碎儀、粉碎機(jī)、超濾器（500ml～5000ml）、冷凍離心機(jī)（800010000rpm，300ml～2000ml）、普通離心機(jī)（5000rpm，2000ml）、臺(tái)式離心機(jī)（18000rpm5ml6）冷凍干燥機(jī)、80度冰箱、制冰機(jī)、酸度計(jì)、電熱恒溫水浴鍋、勻漿機(jī)、蛋白質(zhì)色譜分離系統(tǒng)（核酸蛋白檢測(cè)儀、部分收集器、蠕動(dòng)泵、梯度混合器、φ1025mmh300700mm層析柱）電泳儀及垂直板電泳槽、脫色搖床、紫外可見(jiàn)光分光光度計(jì)、熒光分光

5、光度計(jì)、高效液相色譜、氣相色譜、凝膠成像系統(tǒng)、250ml和500ml旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、微量凱氏定氮儀、常量凱氏定氮儀、5001000W電爐、超聲波清洗器、振動(dòng)混合器、移夜槍（2005000ul）、層析缸、電吹風(fēng)等。六、教學(xué)組織方式六、教學(xué)組織方式兩人一組，所有實(shí)驗(yàn)由學(xué)生設(shè)計(jì)方案，獨(dú)立完成。七、教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)七、教學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)1、學(xué)習(xí)的自主性加大，審核學(xué)生的實(shí)驗(yàn)方案、提供必要的條件。2、講授部分的難點(diǎn)是進(jìn)展、制備思路、原則和常用技術(shù)、方法的

6、學(xué)習(xí)。3、本模塊涉及的儀器特別多，技術(shù)方法多，學(xué)習(xí)難度較大，力求與理論課的對(duì)接、舉一反三。八、難點(diǎn)的解決辦法八、難點(diǎn)的解決辦法：1、認(rèn)真?zhèn)湔n，該講的講深、講透，重點(diǎn)一對(duì)一答疑。2、做好設(shè)計(jì)報(bào)告的審核，提前一個(gè)月做好儀器檢修和藥品的準(zhǔn)備。3、做好必要的單元操作示教和研究過(guò)程的現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo)。九、相關(guān)參考書九、相關(guān)參考書1、孫彥，生物分離工程；2、嚴(yán)?？担蛛x技術(shù)；3、譚天偉，生物分離技術(shù)4、李建武，生物化學(xué)原理和方法；5、生物分離工程實(shí)驗(yàn)指

7、導(dǎo)3淀物和絮狀物。適用范圍：適用范圍：該產(chǎn)品適用于氰化法測(cè)定人體血液血紅蛋白含量時(shí)稀釋血液用。操作步驟：操作步驟：標(biāo)定過(guò)的吸管準(zhǔn)確吸取20微升血液，放入盛有已50倍稀釋后的5ml文齊氏液的試管內(nèi)，吸吸管內(nèi)至無(wú)色，然后搖勻并放置5min，在校正過(guò)的血紅蛋白計(jì)或光電比色計(jì)上測(cè)定血紅蛋白濃度。1.2.31.2.3聚丙烯酰胺凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳（試劑方法參考生物化學(xué)原理和方法）1.31.3血紅蛋白的提取分離血紅蛋白的提取分離提取分離實(shí)驗(yàn)流

8、程：抗凝血100ml紅細(xì)胞粗提液鹽析透析離子交換凝膠過(guò)濾血紅蛋白結(jié)晶II血紅蛋白結(jié)晶II1.3.11.3.1動(dòng)物血液的收集與處理動(dòng)物血液的收集與處理①取動(dòng)物血液80100ml，按1：1加入抗凝劑肝素（1250UmL）混勻備用。②將抗凝血液分裝在4支50ml離心管中，3000rmin，4℃，離心10min，棄去上清收集紅血球。③向壓積紅細(xì)胞中加35倍量預(yù)冷的生理鹽水，輕輕攪勻洗滌，3000rmin，4℃，離心10min，吸出上清液棄去。再

9、用生理鹽水如上洗滌3次、最后吸出上清液棄去，收集紅血球。1.3.21.3.2紅細(xì)胞的破碎和血紅蛋白原液的制備紅細(xì)胞的破碎和血紅蛋白原液的制備方法一：將洗滌后的紅細(xì)胞加2倍量的純水置4℃冰箱中過(guò)夜使其自然溶脹破碎，10000rmin，4℃，離心20min，收集上層血紅蛋白溶液（血紅蛋白粗提液）。方法二：將洗滌后的紅細(xì)胞加2倍量的純水置20℃冰箱中冰凍過(guò)夜次日將冰凍紅細(xì)胞放置室溫或37℃水浴使之融化，搖勻，10000rmin，4℃，離心20

10、min，收集上層血紅蛋白溶液（血紅蛋白粗提液）。方法三：將洗滌后的紅細(xì)胞加2倍量的純水超聲波破碎，破碎條件：功率500W，能量80%，室溫，開(kāi)3秒停2秒，破碎時(shí)間30秒～X秒（180秒）。10000rmin，4℃，離心20min，收集上層血紅蛋白溶液（血紅蛋白粗提液）。【取5mL血紅蛋白粗提液留作血紅蛋白含量測(cè)定和純度分析】1.3.31.3.3鹽析沉淀鹽析沉淀取50ml血紅蛋白粗提液制作鹽析曲線，剩余部分（準(zhǔn)確量體積）用于血紅蛋白的鹽析

11、制備。（1）血紅蛋白鹽析曲線的制作）血紅蛋白鹽析曲線的制作（需要粗酶液40～50ml）a.取7支干凈試管編號(hào)1～7，分別加入粗酶液5ml；b.分別向1～5號(hào)試管中加入飽和硫酸銨1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，然后再分別加入蒸餾水4ml、3ml、2ml、1ml、0ml；分別向6號(hào)、7號(hào)試管中加先入固體硫酸銨0.66g和1.37g，再加飽和硫酸銨5ml，充分搖晃溶解完全后，每管各取5ml2混勻的溶液裝入7ml2離心管中，對(duì)應(yīng)編號(hào)1、