固定化酶法制備魷魚高F值寡肽的研究.pdf

1、魷魚碎肉是魷魚加工過程中產(chǎn)生的邊角料，這些碎肉蛋白質(zhì)含量高，并且含有多種人體必需的氨基酸，同魷魚胴體一樣必需氨基酸組成成分接近于全蛋白，雖然目前采用商業(yè)蛋白酶水解方式可以制備不同生理活性的蛋白和肽，但是直接添加商業(yè)蛋白酶的費(fèi)用較高，難以規(guī)模化應(yīng)用。固定化酶(immobilized enzyme)是相對(duì)游離酶而言的，游離酶固定化后，其穩(wěn)定性增加，而且易從反應(yīng)體系中分離，并且能重復(fù)利用，可以有效降低酶解工藝的成本。故本課題采用固定化酶酶解魷

2、魚碎肉制備高F值寡肽，通過優(yōu)化酶固定化工藝、控制固定化酶解條件，實(shí)現(xiàn)酶解產(chǎn)物的目的性制備目標(biāo)，為固定化酶水解魷魚碎肉蛋白研究提供技術(shù)依據(jù)。
　　本文主要研究?jī)?nèi)容：
　　以魷魚碎肉為原料，通過固定化胃蛋白酶和固定化風(fēng)味酶分步水解、雙級(jí)活性炭柱串聯(lián)吸附法制備高F值寡肽。以10 g魷魚碎肉原料進(jìn)行試驗(yàn)。主要研究結(jié)果如下：第一步通過Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)確定游離胃蛋白酶最佳固定化工藝：殼聚糖濃度2.50％，固定化時(shí)間3.4

3、0 h，固定化溫度35℃，固定化胃蛋白酶的活力回收率可達(dá)74.38%±0.13%，然后通過正交優(yōu)化確定最佳固定化胃蛋白酶酶解工藝：料水比1:5，加酶量9 g，水解時(shí)間5 h，水解溫度45~50℃。在優(yōu)化的酶解條件下，固定化胃蛋白酶水解魷魚碎肉的水解度為14.70%±0.37%。第二步通過Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計(jì)確定游離風(fēng)味酶最佳固定化工藝：海藻酸鈉濃度2.50%，酶液/海藻酸鈉(體積比，酶液濃度為4 g/L)1:2，固定化時(shí)間3

4、.00 h，固定化風(fēng)味酶的活力回收率可達(dá)80.05%±
　　1.33%，然后利用固定化風(fēng)味酶進(jìn)一步水解固定化胃蛋白酶酶解液，通過正交優(yōu)化得到最佳水解工藝：加酶量8 g、pH7.0、水解溫度55℃，兩步酶解后水解度達(dá)到32.09%±0.58%，OD280為0.238±0.001。第三步通過活性炭動(dòng)態(tài)吸附法脫除水解液中的芳香族氨基酸，通過正交優(yōu)化得到最佳吸附工藝：酶解液體積為150 mL，流速為1.0 BV/h， pH為3.0，溫度為