hiv對(duì)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑239;,339;雙脫氫339;脫氧439;乙炔基胸苷(114)耐藥機(jī)制的研究

1、中圖分類號(hào)——U D C ．．．．．．．．，．．．．．．．．．．．．．．．．．．．博士學(xué)位論文學(xué)校代碼! Q §三蘭密級(jí) 公玨H I V 對(duì)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑2 ，，3 ，．雙脫氫．3 ’一脫氧一4 ’一乙炔基胸苷( 1 1 4 ) 耐藥機(jī)制的研究M e c h a n i s m o f 2 ’·3 ' - D i d e h y d r o 一3 ' - d e o x y 一4 ’一e t h y

2、n y l t h y m i d i n e ( 1 1 4 ) r e s i s t a n c e t oH I V作者姓名：學(xué)科專業(yè)：研究方向：學(xué)院( 系、所) ：指導(dǎo)教師：馬 靜臨床醫(yī)學(xué)內(nèi)科學(xué)湘雅二醫(yī)院龔國(guó)忠教授．．論文答辯日期皇蟻 答辯委員會(huì)專勞圭酸中南大學(xué)二零一三年五月 一令一二工F 丑月H I V 對(duì)逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑2 ’，3 ’．雙脫氫．3 ’．脫氧．4 ’．乙炔基胸苷( 1 1 4 )耐藥機(jī)制的研究摘要目的：含有A

3、Z T 相關(guān)突變位點(diǎn)的H I V 對(duì)新藥1 1 4 的耐藥機(jī)制研究方法：實(shí)驗(yàn)分為細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外兩個(gè)部分。細(xì)胞內(nèi)實(shí)驗(yàn)首先通過(guò)克隆產(chǎn)生野生型和含有突變位點(diǎn)病毒的質(zhì)粒，其中突變位點(diǎn)包括T 6 9 S S S ，M 4 1 L ，T 2 1 5 Y ，M 4 1 L ／T 2 1 5 Y ，M 4 1 L ／L 2 1 0 W ／T 2 1 5 Y ，T 6 9 S S S ／L 2 1 0 W ／T 2 1 5 Y 和T 6 9 S S S

4、／M 4 1 L ／L 2 1 0 W 仃2 1 5 Y 。其次，制作大量野生型和含有突變位點(diǎn)的病毒，通過(guò)病毒感染含有熒光素酶的T A M —b l 細(xì)胞，比較新藥1 1 4 與A Z T ，3 T C ，T D F 對(duì)野生型和突變型病毒的抑制作用( I C 5 0 值) 的差異。細(xì)胞外實(shí)驗(yàn)分為酶促動(dòng)力學(xué)反應(yīng)和引物延伸實(shí)驗(yàn)兩個(gè)部分。首先構(gòu)建含有的M 4 1 L ／T 2 1 5 Y ，M 4 1 L ／L 2 1 0 W ／T 2 1

5、5 Y ，T 6 9 S S S ，T 6 9 S S S ／L 2 1 0 W ／T 2 1 5 Y 和T 6 9 S S S ／M 4 l L ／L 2 1 0 W ／T 2 1 5 Y 的E P H 質(zhì)粒，通過(guò)細(xì)菌擴(kuò)增產(chǎn)生大量逆轉(zhuǎn)錄酶。其次，通過(guò)N I ．N T A 提取法提取大量野生型和含有突變位點(diǎn)的逆轉(zhuǎn)錄R T 酶，并通過(guò)F P L C 法純化蛋白。第三，酶促動(dòng)力學(xué)反應(yīng)，在沒(méi)有A T P 存在下，比較天然底物d T T P 和