Wnt5a信號通路介導(dǎo)核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑引起的神經(jīng)炎癥研究.pdf

1、核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑（NRTI）作為高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（HAART）的一個核心組成部分，被廣泛用于抑制人類免疫缺陷病毒（HIV）的復(fù)制和增殖。然而，長期服用NRTI類藥物可引發(fā)神經(jīng)毒性，主要表現(xiàn)為神經(jīng)炎癥和多種神經(jīng)認(rèn)知障礙，如阿耳茨海默氏病、帕金森氏病和慢性疼痛等。盡管NRTI用于治療艾滋病已有數(shù)十年，但目前對于NRTI引發(fā)神經(jīng)炎癥的具體機(jī)制還是不甚明了。Wnt5a是非經(jīng)典Wnt信號的主要配體之一，在組織發(fā)育和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中發(fā)揮重要作

2、用。最近的研究發(fā)現(xiàn)，Wnt5a參與和調(diào)控多種神經(jīng)炎癥反應(yīng)。所以我們推測Wnt5a在NRTI導(dǎo)致的神經(jīng)炎癥中可能起到關(guān)鍵性作用。本研究不僅有助于理解NRTI在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中對神經(jīng)炎癥發(fā)生的影響，而且將為治療HIV-1相關(guān)的神經(jīng)炎癥提供潛在的藥物靶點(diǎn)。
　　為了探究NRTI的治療對中樞神經(jīng)系統(tǒng)不同組織中炎癥因子表達(dá)情況的影響，我們分別用NRTI類藥物AZT(100 mg/kg；sc./days)、3TC(50 mg/kg；sc./da

3、ys)和D4T(10 mg/kg；sc./days)對C57Bl/6小鼠進(jìn)行2、5、10和14天的處理，并于NRTI類藥物給藥結(jié)束時收集中樞神經(jīng)系統(tǒng)的組織。通過Western blotting分析NRTI處理不同時間后小鼠大腦皮層、海馬和脊髓組織中炎癥因子IL-1β，TNF-α和IL-6的表達(dá)水平。Western blotting結(jié)果表明NRTI處理后，炎癥因子在三種神經(jīng)組織中都顯著性增加。
　　我們分別使用GFAP和CD11b標(biāo)

4、記星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞，進(jìn)一步研究NRTI通過激活哪一類神經(jīng)細(xì)胞來調(diào)控免疫反應(yīng)。免疫染色結(jié)果表明，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中NRTI可以顯著激活星形膠質(zhì)細(xì)胞，然而小膠質(zhì)細(xì)胞則沒有被明顯激活。
　　確定NRTI在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中引起神經(jīng)炎癥后，我們通過HE染色進(jìn)一步研究了NRTI對中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織病變的影響情況。組織形態(tài)學(xué)分析表明，短期使用NRTI類藥物未引起海馬和脊髓組織發(fā)生顯著病變。
　　近期有報(bào)道發(fā)現(xiàn)Wnt5a在皮層最初形成時對

5、IL-1β和TNF-α具有重要的調(diào)節(jié)作用，我們推測引起神經(jīng)炎癥的NRTI誘導(dǎo)Wnt5a表達(dá)。通過Western blotting和免疫組織化學(xué)染色的方法檢測到中樞神經(jīng)系統(tǒng)中NRTI可明顯上調(diào)Wnt5a，初步表明NRTI可能激活Wnt5a。為了進(jìn)一步研究Wnt5a對NRTI誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥的作用，我們利用Wnt5a的特異性拮抗劑BOX5來抑制Wnt5a。Western blotting結(jié)果表明，BOX5可以顯著性降低NRTI誘導(dǎo)的炎癥因子上