從牛奶中分離酪蛋白和乳糖

1、從牛奶中分離酪蛋白和乳糖一、引言牛奶中主要的蛋白質(zhì)是酪蛋白，含量約為35gl。酪蛋白在乳中是以酪蛋白酸鈣磷酸鈣復(fù)合體膠粒存在，膠粒直徑約為20～800納米，平均為100納米。在酸或凝乳酶的作用下酪蛋白會沉淀，加工后可制得干酪或干酪素。本實驗利用加酸，當達到酪蛋白等電點PH=4.7時，酪蛋白沉淀。脫脂乳中除去酪蛋白后剩下的液體為乳清，在乳清中含有乳白蛋白和乳球蛋白，還有溶解狀態(tài)的乳糖，乳中糖類的99.8%以上是乳糖，可通過濃縮、結(jié)晶制取乳

2、糖。二、實驗材料和試劑脫脂乳或脫脂奶粉。醋酸醋酸鈉緩沖溶液（PH=4.7），95%乙醇，乙醚，碳酸鈣粉末，苯肼試劑。三、實驗步驟1.從牛奶中分離酪蛋白在燒杯中加入2g脫脂奶粉，再加入40ml40℃，PH=4.7的醋酸醋酸鈉緩沖溶液40ml，用PH精密試紙檢驗液體的PH值。靜置冷卻至室溫，傾去上層清液（留作分離乳糖用），剩下的懸浮液分別裝入兩支離心試管中，用轉(zhuǎn)速為2000轉(zhuǎn)分離心分離3～5分鐘，傾出上層清液，（合并于上一清液中），得酪蛋白

3、粗品。于離心管中加入5ml蒸餾水，用玻棒充分攪拌，洗滌除去其中的水溶性雜質(zhì)（如乳清蛋白，乳糖以及殘留的緩沖溶液），離心后棄去上層液，再用蒸餾水洗一次。于試管中加入5ml95%乙醇，充分攪拌，離心后棄去乙醇溶液，用乙醇洗滌主要是除去磷脂類物質(zhì)。最后再用5ml乙醚以同樣方法洗滌，以除去脂肪類物質(zhì)。將酪蛋白沉淀物涼干，稱重、并計算得率。2.從牛奶中分離乳糖在除去酪蛋白的乳清中，加入1.5gCaCO3粉末，攪拌均勻后加熱至沸。加CaCO3的目的

4、一方面是中和溶液的酸性，防止加熱時乳糖水解，另方面又能使乳白蛋白沉淀。過濾除去沉淀，在濾液中加入1～2粒沸石，加熱濃縮至3～5ml，加入10ml95%乙醇（注意離開火焰）和少量活性炭，攪拌均勻后在水浴上加熱至沸騰，趁熱過濾，濾液必須澄清。加塞放置過夜，乳糖結(jié)晶析出，抽濾，用95%乙醇洗滌產(chǎn)品。3.乳糖成脎試驗取自制乳糖溶于少量水中，濃度約為5%，在試管中加入1ml乳糖溶液，1ml苯肼試劑①，搖勻，試管口用棉花塞住，在沸水浴中加熱，并不時

5、振搖，加熱10～15分鐘后，取出放置冷卻，乳糖脎成結(jié)晶析出。取少量乳糖脎在顯微鏡下觀察其結(jié)晶形態(tài)，可證實為乳糖。①苯阱試劑有毒，小心使用，勿觸及皮膚，如觸及皮膚先用稀醋酸洗，再用水洗。(二)蛋白質(zhì)的抽提通常選擇適當?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來。抽提所用緩沖液的pH、離子強度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定。如膜蛋白的抽提，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑（十二烷基磺酸鈉、tritonX100等），使膜結(jié)構(gòu)破壞，利于蛋

6、白質(zhì)與膜分離。在抽提過程中，應(yīng)注意溫度，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質(zhì)的變性。（三）蛋白質(zhì)粗制品的獲得選用適當?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開來。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進行的分離。常用的有下列幾種方法：1.等電點沉淀法不同蛋白質(zhì)的等電點不同，可用等電點沉淀法使它們相互分離。2.鹽析法不同蛋白質(zhì)鹽析所需要的鹽飽和度不同，所以可通過調(diào)節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì)，并能再度溶解而不