實(shí)驗(yàn)七 植物組織中可溶性蛋白質(zhì)

1、實(shí)驗(yàn)七植物組織中可溶性蛋白質(zhì)、可溶性糖含量的測定I、植物組織中可溶性蛋白質(zhì)的測定、植物組織中可溶性蛋白質(zhì)的測定一、原理由于蛋白質(zhì)中存在著含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸，因此蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)，最大吸收峰在280nm波長處。在此波長范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光密度OD280nm與其濃度呈正比關(guān)系，可作定量測定。二、材料、儀器設(shè)備及試劑（一）材料植物葉片（二）儀器設(shè)備紫外分光光度計(jì)、分析天平、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、研缽、移液管等（三）試劑0.

2、1molLpH7.0磷酸液三、實(shí)驗(yàn)步驟1樣品中蛋白質(zhì)的提取稱取植物葉片0.5~1.0g放入研缽中，加入2mL0.1molL的磷酸緩沖液，研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移至15mL離心管中，再用6mL磷酸緩沖液分次洗滌研缽，洗滌液收集于同一離心管中，在室溫（20~25℃）下放置05~1.0h以充分提取，然后在4000rmin離心10min，將上清液轉(zhuǎn)入25mL容量瓶中，并以磷酸緩沖液定容至刻度，即得待測樣品提取液。2樣品中蛋白質(zhì)含量的測定取適量稀釋后的蛋

3、白質(zhì)提取液，在紫外分光光度計(jì)上，分別于280nm和260nm波長條件下（以磷酸緩沖液為空白對(duì)照），測定提取液的吸收值，代入公式即可計(jì)算出樣品中蛋白質(zhì)的含量。四、結(jié)果計(jì)算樣品中蛋白質(zhì)的濃度（mgmL）=（1.45A280—0.74A260）稀釋倍數(shù)式中：1.45和0.74——校正值。A280——蛋白質(zhì)溶液在280nm處的吸光度。A260——蛋白質(zhì)溶液在260nm處的吸光度Ⅱ、植物組織中可溶性糖的測定Ⅱ、植物組織中可溶性糖的測定蒽酮法蒽酮法

4、一、原理糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反應(yīng)生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應(yīng)生成藍(lán)綠色糠醛衍生物，在一定范圍內(nèi)，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量測定。管號(hào)試劑012345100μgmL葡萄糖溶液（mL）00.20.40.60.81.0蒸餾水（mL）1.00.80.60.40.20蒽酮試劑（mL）5.05.05.05.05.05.0葡萄糖量（μg）020406080100將各管快速搖動(dòng)混勻后，在沸水浴中煮10