水溶性水溶性海星皂苷的分離純化及其抗真菌活性研究

1、水溶性海星皂苷的分離純化及其抗真菌活性研究水溶性海星皂苷的分離純化及其抗真菌活性研究何穎北京化工大學(xué)北方學(xué)院化藥1107摘要摘要：為了分離純化出具有強(qiáng)抗真茵活性的水溶性海星皂苷，以羅氏海盤(pán)車(chē)(Aster／asroUeston／)腕為實(shí)驗(yàn)材料，利用水抽提方法獲得水溶性海星皂苷粗品，依次利用大孔樹(shù)脂和硅膠柱層析對(duì)水溶性海星皂苷進(jìn)行了純化，并對(duì)其抗真茵活性進(jìn)行了測(cè)定。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在30％、50％、70％、80％、95％乙醇溶液的大孔樹(shù)脂柱層

2、析洗脫組分中，70％乙醇溶液洗脫組分對(duì)白色念珠茵和裂殖酵母菌的抗真菌活性最強(qiáng)。70％乙醇溶液洗脫組分經(jīng)硅膠柱層析進(jìn)一步純化后，得到了SF1、SF2、SF3和SF4四種純化樣品，其中SFI純化樣品沒(méi)有抗真菌活性，SF2純化樣品具有極弱的抗真茵活性，SF3和SF4純化樣品均具有很強(qiáng)的抗真菌活性。SF3純化樣品在高壓液相柱層析(HPLC)圖譜中僅顯示單一洗脫峰，表明其純度很高，可應(yīng)用于高效抗真菌藥物的研制。研究結(jié)果為利用水溶性海星皂苷研制高效

3、抗真菌藥物奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：海星；水溶性海星皂苷；抗真菌活性；大孔樹(shù)脂柱層析；硅膠柱薄層層析皂苷，又稱(chēng)皂甙，是一種廣泛存在于植物以及海洋棘皮動(dòng)物中的、具有多種藥理學(xué)活性的物質(zhì)。海星皂苷是海星的次生代謝產(chǎn)物，對(duì)純的海星皂苷的大量試驗(yàn)表明它們具有多種藥理活性：溶血活性、腫瘤細(xì)胞毒性、抗病毒作用、抗革蘭氏陽(yáng)性菌活性、阻斷哺乳動(dòng)物神經(jīng)肌肉傳導(dǎo)作用、Na／KATP酶抑制作用、抗?jié)冏饔靡约翱寡?、麻醉和降血壓活性等…。目前，?duì)海星皂苷的制備

4、多采用甲醇、乙醇等稀醇提取法協(xié)3J，這種工藝方法冗長(zhǎng)復(fù)雜、萃取率低H】，存在著有機(jī)溶劑使用量大、成本高、容易對(duì)環(huán)境造成污染等一系列缺點(diǎn)∞1；同時(shí)提取的海星皂苷水溶性比較差，應(yīng)用時(shí)常需用促溶劑如DMSO等對(duì)其進(jìn)行溶解，這在一定程度上影響了其抗真菌活性，也限制了其在臨床醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用范圍。到目前為止，國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)到對(duì)水溶性海星皂苷的報(bào)道極少，更沒(méi)有利用水溶性海星皂苷進(jìn)行抗真菌活性的研究報(bào)道。本文利用水抽提法、大孔樹(shù)脂柱層析和硅膠柱層析從羅氏海

5、盤(pán)車(chē)(Aster／asrollestoni)腕中分離并純化出水溶性海星皂苷，篩選出具有顯著抗真菌活性的水溶性海星皂苷單體，為利用水溶性海星皂苷開(kāi)發(fā)研制高效抗真菌藥物奠定基礎(chǔ)。1材料與方法材料與方法11材料羅氏海盤(pán)車(chē)(Asteriasrollestoni)采自青島膠州灣海域，裂殖酵母菌(Schizosacomycespombe)和白色念珠菌(Cidaalbicans)由中國(guó)海洋大學(xué)微生物工程實(shí)驗(yàn)室友情惠贈(zèng)，采用YPD培養(yǎng)基(酵母浸膏O5％

6、，蛋白胨1％，葡萄糖2％，瓊脂2％)于28cc培養(yǎng)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購(gòu)自上海亞榮生化儀器廠，冷凍干燥機(jī)購(gòu)自美國(guó)西盟(SIM)公司，AB一8型大孔樹(shù)脂購(gòu)自天津南開(kāi)化工廠，硅膠板及層析用硅膠(200～300目)購(gòu)自青島海洋化工廠，Agilentl100型高壓液相柱層析(HPLC)儀、RID檢測(cè)器和AgilentZBAXEclipseXI)BC18型一斑點(diǎn)，合并收集為SC4純化樣品。對(duì)四種純化樣品分別進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和冷凍干燥后，冷凍保存?zhèn)溆?。A裂殖酵

7、母菌；B白色酵母菌a30％乙醇溶液洗分_b50％乙醇溶液洗脫組分；c70％乙醇溶液洗脫組分；d。80％乙醇溶液洗脫組分；e95％乙醇溶液洗脫組分；各洗脫組分的使用質(zhì)量濃度均為05m∥mL表l各種大孔樹(shù)脂柱洗脫組分對(duì)裂殖酵母菌和白色念珠菌的抑菌環(huán)大小(n=3，is)23硅膠柱層析純化樣品的抗真菌活性鑒定質(zhì)量濃度為O5Ⅱl∥TlL的SF1、SF2、SF3和SF4純化樣品對(duì)裂殖酵母菌和白色念珠菌的抑菌環(huán)大小如圖3所示，抑菌環(huán)大小測(cè)定及其MIC