微生物的計數(shù)——血球計數(shù)板法

1、微生物的計數(shù)微生物的計數(shù)——血球計數(shù)板法血球計數(shù)板法【摘要】摘要】測定微生物細胞數(shù)量的方法很多，有分光光度法、顯微直接計數(shù)法和平板計數(shù)法。分光光度法比較簡便，易操作，但是會使數(shù)據(jù)嚴重偏大。而平板計數(shù)法則會使實驗數(shù)據(jù)嚴重偏小。顯微計數(shù)法適用于各種含單細胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計數(shù)板，一般細菌則采用彼得羅夫霍澤（PetrofHausser）細菌計數(shù)板。兩種計數(shù)板的原理和部件相同，

2、只是細菌計數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計數(shù)板較厚，不能使用油鏡，計數(shù)板下部的細菌不易看清。本實驗采用血球計數(shù)板法，主要目的是了解血球計數(shù)板法的構造和使用方法，學會用血球計數(shù)板對酵母菌細胞進行計數(shù)。一、實驗目的與要求一、實驗目的與要求1、了解微生物計數(shù)常用的三種方法：分光光度法；平板計數(shù)法；血球計數(shù)板法。2、了解血球計數(shù)板的構造和使用方法。3、學會用血球計數(shù)板對酵母細胞進行計數(shù)。二、基本原理二、基本原理利用血球計數(shù)板在顯微鏡下直接計

3、數(shù)，是一種常用的微生物計數(shù)方法。此法的優(yōu)點是直觀、快速。將經過適當稀釋的菌懸液（或孢子懸液）放在血球計數(shù)板載玻片與蓋玻片之間的計數(shù)室中，在顯微鏡下進行計數(shù)。由于計數(shù)室的容積是一定的（0.1mm2），所以可以根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來換算成單位體積內的微生物總數(shù)目。由于此法計得的是活菌體和死菌體的總和，故又稱為總菌計數(shù)法。血球計數(shù)板，通常是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構成三個平臺。中間的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各

4、刻有一個方格網，每個方格網共分九個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室，微生物的計數(shù)就在計數(shù)室中進行。計數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個大方格分成16個中方格，而每三、實驗材料三、實驗材料1）菌種：釀酒酵母菌2）用品：顯微鏡、血球計數(shù)板、酒精燈、蓋玻片、接種環(huán)、番紅染液、膠頭滴管。四、實驗方法四、實驗方法1、實驗流程圖2、實驗步驟1）鏡檢計數(shù)室：在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進行鏡檢。若有污物，則需清洗后才能進行計數(shù)。2）將釀酒酵母菌懸液進

5、行適當稀釋，菌液如不濃，可不必稀釋。3)取潔凈的血球計數(shù)板一塊，在計數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。然后在顯微鏡下找到計數(shù)室。若計數(shù)室沾有雜質或者菌體，要用蒸餾水沖洗計數(shù)板，用濾紙吸干其上的水分。然后再放到顯微鏡下找到計數(shù)室。4)將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數(shù)板中間平臺兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數(shù)區(qū)，勿使氣泡產生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。5)靜置片刻，先在低倍鏡下找

6、到計數(shù)區(qū)后，再轉換高倍鏡觀察并計數(shù)。由于生活細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應減弱光照的強度。6)計數(shù)時若計數(shù)區(qū)是由16個大方格組成，按對角線方位，數(shù)左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數(shù)。如果是25個大方格組成的計數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個大方格外，還需數(shù)中央l個大方格的菌數(shù)（即80個小格）。如菌體位于大方格的雙線上，計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。本實驗采用25格16格的血球計數(shù)板。計數(shù)時應數(shù)5個大