幾種表達(dá)載體

1、表達(dá)載體表達(dá)載體一、原核細(xì)胞表達(dá)載體一、原核細(xì)胞表達(dá)載體1.pBAD載體:特點(diǎn)該表達(dá)質(zhì)粒含有araBAD(arabinose)操縱子的PBAD啟動(dòng)子和編碼該啟動(dòng)子的正負(fù)調(diào)控子基因araC，具有緊密調(diào)控功能和高水平表達(dá)外源蛋白質(zhì)的原核細(xì)胞表達(dá)載體。請(qǐng)注意:1.當(dāng)要扦入其他信號(hào)肽片段，改建此載體時(shí)，請(qǐng)不要利用該載體上的Nde1Ec1BamH1Kpn1和Pst1位點(diǎn)，以免造成重組困難，因?yàn)榍笆鰞?nèi)切酶在此載體上均有二個(gè)位點(diǎn)，最好使用只有一個(gè)酶切

2、位點(diǎn)的Sac1和Hind111位點(diǎn)。同時(shí)記住，如在不含任何信號(hào)肽的PBAD表達(dá)質(zhì)粒扦入信號(hào)肽，其非編碼N末端要包含核糖體結(jié)合位點(diǎn)(RBS)核苷酸序列。2在使用含OmpA分泌信號(hào)肽的PBAD表達(dá)質(zhì)粒時(shí)，請(qǐng)應(yīng)用OmpA分泌信號(hào)肽上的Sac1以及載體Hind111酶切位點(diǎn)，這些在載體序列上都是單個(gè)酶切位點(diǎn)。pBAD載體驅(qū)動(dòng)大分子蛋白質(zhì)在原核細(xì)胞igami(DE3)內(nèi)高效表達(dá)2.2.pCAlnpCAln&pCAlpCAlpelBpelB載體載體

3、特點(diǎn):該原核細(xì)胞表達(dá)載體是來源于以T7RNA聚合酶為基礎(chǔ)的pET載體，含有T7LacO啟動(dòng)子、編碼鈣調(diào)素結(jié)合多肽標(biāo)鑒和凝血酶切點(diǎn)的核苷酸序列。因此，該表達(dá)載體在E.coliBL21(DE3)或BL21(DE3)pLysS宿主菌中能高水平表達(dá)外源蛋白質(zhì)、且這種表達(dá)的外源蛋白質(zhì)因帶有鈣調(diào)素結(jié)合多肽和凝血酶切點(diǎn)，故該蛋白產(chǎn)物易于純化和產(chǎn)業(yè)化。此外，本公司利用分泌信號(hào)肽PelB，構(gòu)建成新型的的原核細(xì)胞表達(dá)載體PcalPelB。此載體表達(dá)的蛋白產(chǎn)

4、物能在分泌肽PelB的指引下進(jìn)入細(xì)胞周質(zhì)。(a).PcalnMKRRWKKNFIAVSAANRFKKISSSGALLVPCATATGAAGGGACGATGGAAAAAACAATTTCATAGCCGTCTCAGCAGCCAACCCGCTTTAAGAAAATCTCATCCTCCGGGGCACTTCTGGTTCCNde1RGSPGILDSMGRLELKLRSAGCGTGGATCCCCGGGAATTCTAGACTCCATGGGTCGACTCGA