藥典》藥品微生物檢查修訂內(nèi)容及背景

1、2005年版藥典微生物限度標(biāo)準(zhǔn)修訂情況,一、2005年版微生物限度標(biāo)準(zhǔn)的制訂原則,2000年版：細(xì)菌數(shù)、酵母菌數(shù)和霉菌數(shù)按劑型制訂；控制菌（致病菌）按給藥途徑制訂。2005年版：均按給藥途徑制訂。,二、2005年版微生物限度標(biāo)準(zhǔn)的應(yīng)用,本版藥典明確指出:藥品的生產(chǎn)、貯存、銷售過程中的檢驗(yàn),原料及輔料(中藥提取物及輔料)的檢驗(yàn), 新藥標(biāo)準(zhǔn)制訂,進(jìn)口藥品標(biāo)準(zhǔn)復(fù)核,考察藥品質(zhì)量及仲裁等,除另有規(guī)定外，其微生物限度均以本標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)。,三、20

2、05年版微生物限度標(biāo)準(zhǔn)的控制項(xiàng)目,●雜菌數(shù)：細(xì)菌數(shù) 霉菌和酵母菌數(shù)●控制菌（致病菌）:大腸埃希菌 大腸菌群 沙門菌 銅綠假單胞菌 金黃色葡萄球菌 梭菌,四、2005年版微生物限度標(biāo)準(zhǔn)的分類,1. 制劑通則、品種項(xiàng)下要求無菌的制劑及標(biāo)示無菌的制劑,2.口服給藥制劑,●不含藥材原粉的制劑●含藥材原粉的制劑*●含豆豉、神曲等發(fā)酵成分的制劑*,3. 局部給藥制劑,⑴ 用于手術(shù)、燒傷及嚴(yán)重?fù)p傷的局部

3、給藥制劑 ⑵用于表皮或黏膜不完整的含藥材原粉的局部給藥制劑* ⑶用于表皮或黏膜完整的含藥材原粉的局部給藥制劑* ⑷眼部給藥制劑 ⑸耳、鼻及呼吸道吸入給藥制劑 ⑹陰道、尿道給藥制劑 ⑺直腸給藥制劑 ⑻其它局部給藥制劑,五、2005版制劑通則項(xiàng)下的 微生物限度要求,,lb-04-12-24,9,2005版化學(xué)藥制劑通則項(xiàng)下的微生物限度要求,無菌檢查：注射劑、植入劑*、沖洗劑*。無菌檢查及微生物限度檢查：軟膏

4、劑、眼用制劑、氣霧 劑 、噴霧劑、散劑、耳用制劑、鼻用制劑*、凝膠劑* 、 乳膏劑* 。 微生物限度檢查：粉霧劑、口服溶液劑、口服混懸劑 、口服乳劑、搽劑、洗劑、局部用片劑*、酊劑*、栓劑*、糖漿劑*、膜劑*、貼劑* 、灌腸劑* 、糊劑* 、涂劑*、涂膜劑* 。原則性要求：丸劑、口服片劑、膠囊劑、顆粒劑。,lb-04-12-24,10,2005版中藥制劑通則項(xiàng)下的微生物限度要求,無菌檢查：注射劑。無菌檢查及微生物限度檢

5、查：散劑*、軟膏劑*、眼用制劑*、鼻用制劑*、氣霧劑*、噴霧劑*。 微生物限度檢查：丸劑、顆粒劑、片劑、錠劑、煎膏劑、膠劑、糖漿劑、合劑、滴丸劑、膠囊劑、酒劑、酊劑、流浸膏劑、浸膏劑、露劑、茶劑、栓劑、貼膏劑(貼劑)*、凝膠劑*、搽劑*、洗劑*、涂膜劑*.不要求：膏藥。,lb-04-12-24,11,2005版三部制劑通則項(xiàng)下的微生物限度要求,無菌檢查：注射劑、外用溶液劑、灌洗劑。微生物限度檢查：片劑*、栓劑、膠囊劑*

6、、散劑*、顆粒劑*、氣霧劑。無菌檢查或微生物限度檢查：軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、噴霧劑、眼用制劑、鼻用制劑。,lb-04-12-24,12,六、品種項(xiàng)下的微生物限度要求,輔料：乳糖、淀粉、糊精、玉米朊、精制玉米油等。純化水：微生物限度 取本品，采用薄膜過濾法處理后，依法檢查（附錄Ⅺ J），細(xì)菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每1ml不得過100個(gè)。 注射用水：微生物限度 取本品至少200ml，采用薄膜過濾法處理后，依法檢查（附錄Ⅺ J）

7、，細(xì)菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每100ml不得過10個(gè)。,2005年版無菌檢查法的修訂情況,lb-04-12-24,14,2005版藥典附錄的無菌檢查法較2000 年 版有較大的改動(dòng)；增加試驗(yàn)的可操作性；方法更具科學(xué)性，提高檢出率，保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性; 縮小與先進(jìn)國家藥典的無菌檢查法的差別 。,2005年版無菌檢查法的特點(diǎn),,lb-04-12-24,15,增修訂內(nèi)容（1）－無菌檢查試驗(yàn)環(huán)境,環(huán)境：試驗(yàn)應(yīng)在潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度

8、100級(jí)的單項(xiàng)流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。監(jiān)測：應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈級(jí)的檢測。 隔離系統(tǒng)按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無菌檢查的要求。,lb-04-12-24,16,增修訂內(nèi)容（2）－無菌試驗(yàn)用培養(yǎng)基,輔料：乳糖、淀粉、糊精、玉米朊、精制玉米油等。純化水：微生物限度 取本品，采用薄膜過濾法處理后，依法檢查（附錄Ⅺ J），細(xì)菌、霉菌和酵母菌

9、總數(shù)每1ml不得過100個(gè)。 注射用水：微生物限度 取本品至少200ml，采用薄膜過濾法處理后，依法檢查（附錄Ⅺ J），細(xì)菌、霉菌和酵母菌總數(shù)每100ml不得過10個(gè)。,lb-04-12-24,17,增修訂內(nèi)容（2）－無菌試驗(yàn)用培養(yǎng)基,培養(yǎng)基的命名培養(yǎng)基的裝量培養(yǎng)基的適用性檢查：無菌性檢查，靈敏度檢 查。培養(yǎng)基的貯藏,lb-04-12-2

10、4,18,增修訂內(nèi)容（3）－稀釋液、沖洗液,0.1%蛋白胨水溶液 PH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液,lb-04-12-24,19,所有滅菌程序均應(yīng)驗(yàn)證，方可采用。防止滅菌不徹底或過渡滅菌。,增修訂內(nèi)容（4）－滅菌,lb-04-12-24,20,增修訂內(nèi)容（5）－無菌檢查方法的驗(yàn)證,何時(shí)驗(yàn)證驗(yàn)證用菌株的選擇及要求驗(yàn)證方法結(jié)果判斷,lb-04-12-24,21,增修訂內(nèi)容（6）－檢驗(yàn)數(shù)量,明確原“最低檢驗(yàn)量”是針對(duì)每種培養(yǎng)基。修訂

11、了大體積注射劑、抗生素原料藥、醫(yī)療器具的批產(chǎn)品最低檢驗(yàn)數(shù)量。規(guī)定同一品種用直接接種法與薄膜過濾法的檢驗(yàn)數(shù)量應(yīng)一致，實(shí)際上是增加了上市抽驗(yàn)樣品薄膜過濾法的檢驗(yàn)數(shù)量。各容器的樣品裝量不夠接種兩種培養(yǎng)基，應(yīng)增加一倍的檢驗(yàn)數(shù)量。,lb-04-12-24,22,增修訂內(nèi)容（7）－檢驗(yàn)量,另外規(guī)定了固體供試品的檢驗(yàn)量。采用直接接種法時(shí)，若每支（瓶）供試品的裝量按規(guī)定足夠接種兩份培養(yǎng)基，則應(yīng)分別接種硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和改良馬丁培養(yǎng)基， 說明了

12、檢驗(yàn)量比2000版增加了一倍。薄膜過濾法的檢驗(yàn)量應(yīng)不少于直接接種法的總接種量，只要供試品特性允許，應(yīng)將所有容器內(nèi)的全部內(nèi)容物過濾。,lb-04-12-24,23,增修訂內(nèi)容（8）－供試品的無菌檢查⑴,檢查法的選擇：規(guī)定只要供試品性狀允許，應(yīng)盡量采用薄膜過濾法。供試品的處理：詳細(xì)描述了各類型供試品的供試液制備法。,lb-04-12-24,24,增修訂內(nèi)容（8）－供試品的無菌檢查⑵,檢查法：薄膜過濾法、直接接種法。培養(yǎng)時(shí)間：2000版

13、規(guī)定培養(yǎng)7天，2005版規(guī)定培養(yǎng)14天。培養(yǎng)溫度：改良馬丁培養(yǎng)基置23～28℃培養(yǎng)。,lb-04-12-24,25,增修訂內(nèi)容（9）－結(jié)果判斷,以一次檢出為準(zhǔn)，除非有證據(jù)充分證明檢出的微生物非供試品本身所致，原檢驗(yàn)結(jié)果無效，可復(fù)試。修訂理由：操作環(huán)境、實(shí)驗(yàn)條件的改善；低污染供試品的檢出率問題。復(fù)試。,lb-04-12-24,26,增修訂內(nèi)容（10）—無菌檢查法的局限,本版藥典無菌檢查法指出：若供試品符合無菌檢查法的規(guī)定，僅表明

14、了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)被微生物污染。,lb-04-12-24,27,2005年版藥典微生物限度檢查法的修訂情況,二00四年十月,lb-04-12-24,28,起草的指導(dǎo)思想: 完善檢查法. 增加試驗(yàn)的可操作性. 使方法更具科學(xué)性，保證檢驗(yàn)結(jié)果 的準(zhǔn)確性. 與國際接軌.,微生物限度

15、檢查法,,lb-04-12-24,29,增、修訂內(nèi)容（1）-總則⑴,操作環(huán)境● 潔凈度：微生物限度檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度10000級(jí)下的局部潔凈度100級(jí)的單向流空氣區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。檢驗(yàn)全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染。 ● 潔凈度定期檢測:單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按《醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌、和沉降菌的測試方法》的現(xiàn)行國家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度驗(yàn)證。,lb-04-12-24,30,增、修訂內(nèi)容（1）-總則⑵,●

16、霉菌、酵母菌培養(yǎng)溫度為23～28℃?！?結(jié)果報(bào)告：以1g、1ml、10g、10ml 或 10cm2 為單位報(bào)告。,lb-04-12-24,31,增、修訂內(nèi)容（2）-檢驗(yàn)量,● 隨機(jī)抽取不少于檢驗(yàn)量（兩個(gè)以上最小包裝單位）的3倍?！?貴重、微量樣品的檢驗(yàn)量可以酌減。● 要求檢查沙門菌的供試品其檢驗(yàn)量應(yīng)增加10g或10ml。,lb-04-12-24,32,增、修訂內(nèi)容（3）-供試液制備⑴,● 表面活

17、性劑、中和劑或滅活劑：應(yīng)證明其有效性及對(duì)微生物的生長和存活無影響?！?供試液從制備至加入檢驗(yàn)用培養(yǎng)基，不得超過1小時(shí)?！?供試液制備若需用水浴加溫時(shí)，溫度不應(yīng)超過45℃。 ● 供試液的體積：100ml。,lb-04-12-24,33,增、修訂內(nèi)容（3）-供試液制備⑵,供試品分類液體供試品 固體、半固體或黏稠液性供試品需用特殊供試液制備方法的供試品 非水溶性供試品 膜劑供試品

18、 腸溶及結(jié)腸溶制劑供試品 氣霧劑、噴霧劑供試品 具抑菌活性的供試品,lb-04-12-24,34,增、修訂內(nèi)容（3）-供試液制備⑶,● 非水溶性供試品 ：增加“十四烷酸異丙酯法” ?！?結(jié)腸溶制劑供試品 ：用pH7.6無菌磷酸鹽 緩沖液溶解?！?具抑菌活性的供試品：增加方法的可操作 性。,lb-04-12-24,35,增、修訂內(nèi)容（4）——滅菌,培養(yǎng)基及稀釋劑等滅菌

19、:采用驗(yàn)證合格的滅菌程序進(jìn)行滅菌。,lb-04-12-24,36,增、修訂內(nèi)容（5）——稀釋劑,稀釋劑：pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖溶液 pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液 pH7.6無菌磷酸鹽緩沖液,lb-04-12-24,37,增、修訂內(nèi)容（6）-細(xì)菌、霉菌及酵母菌計(jì)數(shù),● 計(jì)數(shù)方法：平皿法、薄膜過濾法● 按已驗(yàn)證的計(jì)數(shù)方法進(jìn)行供試品的細(xì)菌、霉菌及酵母菌

20、菌數(shù)的測定。,lb-04-12-24,38,細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)-平皿法,●培養(yǎng)時(shí)間:必要時(shí)，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時(shí)間至5～7天 .●點(diǎn)計(jì)霉菌和酵母菌數(shù).●同稀釋級(jí)兩個(gè)平板的菌落平均數(shù)不小于15時(shí)，則兩個(gè)平板菌落數(shù)不能相差1倍或以上?！衽囵B(yǎng)基平板上生長特殊菌落.●菌數(shù)報(bào)告規(guī)則.,lb-04-12-24,39,細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù) -薄膜過濾法,方法菌數(shù)報(bào)告規(guī)則,

21、lb-04-12-24,40,增、修訂內(nèi)容（7）-控制菌檢查⑴,修訂特點(diǎn): 減少篇幅 不作具體生化試驗(yàn)的規(guī)定 增加鑒定方法 適應(yīng)微生物分類變化要求 增加控制菌檢查項(xiàng),lb-04-12-24,41,增、修訂內(nèi)容（7）-控制菌檢查⑵,修訂的檢查法 大腸埃希菌檢查法、銅綠假單胞菌檢查法、 沙門菌檢查法、金黃色葡萄球菌檢查法。新增的檢查法大腸菌群檢查法、梭菌檢查法檢查法。,lb-04-1

22、2-24,42,增、修訂內(nèi)容（7）-控制菌檢查⑶,供試品的控制菌檢查應(yīng)按已驗(yàn)證的方法進(jìn)行，增菌培養(yǎng)基的實(shí)際用量同控制菌檢查方法的驗(yàn)證。,lb-04-12-24,43,藥品微生物限度檢查法的驗(yàn)證,lb-04-12-24,44,● 驗(yàn)證的目的: 確認(rèn)所采用的方法適合于供試品的微生物限度檢查。 ● 驗(yàn)證的意義：保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可靠及檢驗(yàn)方法的完整性。,,lb-04-12-24,45,● 微生物限度檢查法驗(yàn)證的必要性 理論

23、、試驗(yàn)結(jié)果 ● 驗(yàn)證的內(nèi)容 準(zhǔn)確性(回收率)、專屬性,,lb-04-12-24,46,驗(yàn)證的類型● 前驗(yàn)證: 建立藥品的微生物限度檢查法時(shí).● 再驗(yàn)證: 修訂的檢驗(yàn)方法;供試品的組分或原檢驗(yàn)條件發(fā)生改變可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí) ;定期的方法驗(yàn)證.,lb-04-12-24,47,驗(yàn)證用菌株：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠 菌、黑曲霉、枯草桿菌。菌株選擇的原則:代表性,普遍性,低或非致病性,標(biāo)準(zhǔn)

24、 菌株(或該藥品中常見的污染菌)。菌種的要求：不得超過5代。采用適宜的方法保存。菌液制備:50～100cfu/ml。,細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證⑴,lb-04-12-24,48,細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法的驗(yàn)證⑵,驗(yàn)證方法 試驗(yàn)組 菌液組 稀釋劑對(duì)照組 供試品對(duì)照組,lb-04-12-24,49,細(xì)菌、霉菌、酵母菌計(jì)數(shù)方法

25、的驗(yàn)證⑶,結(jié)果判斷：供試品組的菌回收率、對(duì)照組的 菌回收率。判斷標(biāo)準(zhǔn): 菌回收率均不低70% 。,lb-04-12-24,50,控制菌檢查法的驗(yàn)證⑴,試驗(yàn)菌株：按規(guī)定檢查的控制菌選擇相應(yīng)驗(yàn)證的菌株。陰性對(duì)照菌株:金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、梭菌用大腸埃希菌；大腸埃希菌、沙門菌、大腸菌群用金黃色葡萄球菌。菌種的要求：不得超過5代。采用適宜的方法保存。菌液制備:10～100cfu/ml。,lb-04-12-24

26、,51,控制菌檢查法的驗(yàn)證⑵,驗(yàn)證方法：試驗(yàn)組、陰性菌對(duì)照組。結(jié)果判斷：試驗(yàn)組應(yīng)檢出、陰性菌對(duì)照組不得檢出。,lb-04-12-24,52,藥品微生物限度檢查法驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果不符合要求的處理方法,中和法培養(yǎng)基稀釋法薄膜過濾法離心沉淀法聯(lián)合方法,lb-04-12-24,53,微生物限度檢查用的菌種、菌液制備及計(jì)數(shù)方法,●菌種要求: 傳代次數(shù),保藏技術(shù)●制備方法: 液體培養(yǎng)物直接稀釋法 細(xì)菌