急性毒性實驗終結(jié)版

1、急性毒性試驗,－LD50 與LC50 的測定,急性毒性試驗,實驗?zāi)康募耙饬x：確定受試物的半數(shù)致死劑量LD50/LC50、觀察受試物所致的急性中毒癥狀及其毒性作用特點，為進一步的毒性試驗提供重要的參考依據(jù)。急性毒性試驗的染毒方式可有多種，包括經(jīng)口、經(jīng)呼吸道、經(jīng)皮及注射染毒方式等。,經(jīng)口急性毒性試驗（LD50）,試驗?zāi)康?學(xué)習(xí)急性毒性試驗的實驗設(shè)計原則 熟練掌握經(jīng)口灌胃染毒操作技術(shù) 掌握LD50計算方法和急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)

2、試驗內(nèi)容 動物選擇和性別鑒定 稱重、編號和隨機分組 小鼠經(jīng)口灌胃操作技術(shù) 毒性癥狀觀察、LD50計算和毒性分級,操作步驟 動物選擇及性別辨認(rèn) 急性毒性實驗一般首選哺乳動物，其中又以大小鼠最為常用。大、小鼠主要依據(jù)肛門與生殖器之間的距離來區(qū)分。遠——♂、近——♀。成年鼠：雄性臥位可見睪丸，雌性可見腹部有12個乳頭。 動物稱重、編號和隨機分組應(yīng)依據(jù)統(tǒng)計學(xué)原則進行隨機分組。,,,,,,,,,1,2,3,4,5,

3、6,7,8,9,,,受試物劑量選擇 對于一種新的化學(xué)物質(zhì)，劑量選擇可參照同系物的毒性或文獻資料加以估計，先用少量動物以組距較大的一系列劑量進行預(yù)實驗，找出粗略的致死劑量范圍，然后再設(shè)計出正式實驗劑量組受試物配制本次試驗所用的受試物是80％的敵敵畏(DDVP)原液。按照事先設(shè)計的劑量分別稀釋配制為幾種不同濃度的受試物溶液，而各個劑量組的動物均給予相同單位體重體積的受試化學(xué)物。,劑量mg/kg 原液量(g

4、) 原液量(ml) 定容量(ml) 原液量 (ml) 36.44 0.1139 0.0813 50 0.0948 51.02 0.1594 0.113

5、9 50 0.1327 71.43 0.2232 0.1594 50 0.1858 100 0.3125 0.2232 50 0.2603

6、 140 0.4375 0.3125 50 0.3642 196 0.6125 0.4375 50 0.5099,,,,敵敵畏（DDVP）配制：（組距1.4，給藥量0.2ml/10g）,（4℃）,（25

7、℃ ）,灌胃操作將動物固定成垂直體位，腹部面向操作者，使動物的上消化道固定成一直線毒性作用/中毒癥狀和動物死亡情況觀察高劑量組動物的死亡常很快發(fā)生，染毒后應(yīng)即刻密切觀 察。觀察和記錄中毒癥狀及出現(xiàn)的時間，死亡數(shù)量和時間及死亡前的特征。按照實驗結(jié)果，填寫急性毒性實驗記錄表。中毒的癥狀觀察：興奮、流涎、肌震顫、抽搐、管狀尾、呼吸減慢、呼吸困難、四肢無力、站立不穩(wěn)、大小便失禁、大劑量側(cè)臥以致死亡。,改進寇氏法是利用劑量對數(shù)

8、與死亡率呈S型曲線而設(shè)計的方法，又稱Karber法或平均致死量法。本法要求每個染毒劑量組動物數(shù)要相同，各劑量組組距呈等比級數(shù)，死亡率呈正態(tài)分布，最低劑量組死亡率呈80%。,LD50計算（改良寇氏法）,根據(jù)實驗動物中毒癥狀、死亡時間、特征和LD50，按受試物種類，分別參照相應(yīng)的經(jīng)口急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)進行評定，判斷該受試物的毒性大小及毒性特征。,毒性分級及結(jié)果評定,,健康成年小鼠若干只（按每組5~6人，每組10只動物，♂♀各半）、50 ml容

9、量瓶(每組1個)、加樣器（200μl、1000μl）、加樣槍頭、DDVP原液、1 ml玻璃注射器、灌胃針頭（每組2套）、棉簽、染液、LD50記錄紙、小鼠籠（每組2個）、電子天平（2臺）、搪瓷托盤（每組一個）、受試物、苦味酸酒精飽和液、0.5%品紅溶液或其它染色劑。,實驗課所需準(zhǔn)備的試劑和材料：,經(jīng)呼吸道急性毒性試驗（LC50）,實驗?zāi)康膶W(xué)習(xí)靜式呼吸道染毒操作方法 學(xué)習(xí)測定和計算LC50的試驗步驟和方法。實驗原理（染毒方式）

10、 呼吸道吸入染毒可分為兩種方式，一種是動式吸入，一種是靜式吸入。,靜式呼吸道吸入染毒： 優(yōu)點：設(shè)備簡單、操作方便、消耗受試物少、適用于小動物 接觸易揮發(fā)液 態(tài)化合物的急性毒性研究。 缺點：受試物濃度難維持恒定，而且實驗動物有經(jīng)皮吸收的 可能。動式吸入： 優(yōu)點：能即時補入新鮮空氣和排出污濁空氣，氧分壓，二氧 化

11、碳分壓，溫度、濕度，受試物濃度保持恒定。 缺點：設(shè)備復(fù)雜，消耗受試物多、易污染環(huán)境,染毒柜內(nèi)受試物濃度的計算,注意單位！,,,,試劑和材料 實驗動物及器材 健康成年小鼠若干只，（每組10只，♂♀各半），小鼠籠（每組2個）。靜式吸入染毒柜6個、吸管、動物秤、記錄紙。 試劑 受試物（易揮發(fā)液體，苯（原液））、苦味酸酒精飽和液、0.5%品紅溶液或其他染色劑。,操作步驟 選擇健康實驗動

12、物，稱重（精確到0.1g），編號，隨機分組。劑量分組,呼吸道吸入染毒： 依設(shè)計劑量濃度及染毒柜體積，計算需要加入的受試物量。將5♂、5♀共10只小鼠→放入靜式染毒柜內(nèi)→加蓋（注：每只小鼠每小時所需要的氣積為3L）。將液態(tài)受試物經(jīng)加藥孔加到接物蒸發(fā)器（紗布、濾紙、蒸發(fā)皿或小型加熱器）上→開啟小電扇，計時→觀察、記錄中毒癥狀和動物死亡情況。染毒結(jié)束后，關(guān)閉電源，打開蓋子，驅(qū)走柜內(nèi)殘存的含毒空氣，取出動物，存活者歸籠繼續(xù)觀察。

13、（癥狀：嘔吐、昏迷、抽搐、呼吸麻痹而死亡） LC50計算：同LD50,急性毒性試驗的觀察和記錄內(nèi)容主要包括4個方面：中毒體征及發(fā)生過程、死亡情況和時間分布、體重和病理形態(tài)學(xué)變化。觀察和記錄中毒癥狀及出現(xiàn)的時間，死亡數(shù)量和時間及死亡前的特征。急性毒性試驗觀察周期一般為14天，LD50或LC50計算時以觀察周期內(nèi)各組動物的總死亡數(shù)為依據(jù)。根據(jù)觀察情況分析中毒特點和毒作用靶器官。按照實驗結(jié)果，填寫急性毒性實驗記錄表。,中毒癥狀和動物死亡

14、情況觀察,結(jié)果評定/結(jié)果評價 依據(jù)實驗動物中毒癥狀、死亡時間、LC50及急性毒作用帶，參考相應(yīng)的急性毒性分級標(biāo)準(zhǔn)，評價毒物的急性毒性強弱，判斷該受試物的毒性大小及其毒性特征。,,實驗報告,實驗動物的種屬、品系、性別及來源。實驗前動物禁食和健康狀況。實驗動物體重和隨機分組情況。受試物的名稱、來源、純度、性狀等情況。詳細描述實驗觀察的中毒表現(xiàn)和死亡情況等。 LD50/LC50的計算方法和結(jié)果。 受試物的毒性