小鼠甲苯急性毒性實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、小鼠甲苯急性毒性實(shí)驗(yàn)研究目的：研究甲苯急性毒性，觀察不同劑量小鼠腹腔注射甲苯：①急性中毒一般表現(xiàn)及神經(jīng)系統(tǒng)表現(xiàn)；②急性中毒肝、心、腎、肺組織形態(tài)病理學(xué)改變；③免疫組織化學(xué)研究腦急性中毒所引起的神經(jīng)遞質(zhì)與酶的改變；④探討急性毒性危害機(jī)制。方法：小鼠腹腔注射甲苯制作急性中毒模型，甲苯組分別按8000mg/kg、4000mg/kg、2000mg/kg、1000mg/kg、500mg/kg劑量組，對(duì)照組為NS組，每組15只，雌雄各半。染毒后觀察

2、急性中毒行為表現(xiàn)，分組記錄死亡時(shí)間及死亡數(shù)，死亡鼠及時(shí)取肝組織分析肝濕重比，定量描述肝損傷。4d、6d、8d、10d、12d、14d運(yùn)用程控自主活動(dòng)箱檢測(cè)，記錄3min內(nèi)小鼠活動(dòng)次數(shù)，了解甲苯急性毒性對(duì)小鼠自主活動(dòng)性的影響。選擇2000mg/kg、1000mg/kg、500mg/kg劑量組及NS組，在1d、7d、14d取小鼠的腦、肝、心、腎、肺組織；死亡鼠及時(shí)取組織，常規(guī)石蠟包埋和切片。①各組織常規(guī)HE染色觀察組織病理學(xué)改變。②腦組織N

3、issl硫堇染色觀察大腦皮層及海馬神經(jīng)元尼氏體改變。③免疫組織化學(xué)ABC法，研究小鼠大腦皮層的ChAT、GABA、Glu陽性細(xì)胞的表達(dá)變化。結(jié)果：①甲苯具有急性毒性；小鼠甲苯染毒各組都有急性中毒的表現(xiàn)，表現(xiàn)為抑制狀態(tài)，扭體，反應(yīng)遲鈍，靜伏，瞇眼，眼部有分泌物，出汗，呼吸急促轉(zhuǎn)衰弱，食欲降低，甚至出現(xiàn)死亡。②運(yùn)用寇氏法公式LD50=1782.38mg/kg，SIgLD50=0.0602(LD50的標(biāo)準(zhǔn)誤)，LD5095％CI(可信區(qū)間)=

4、(1358.312338.84)mg/kg；③自主活動(dòng)明顯降低(p＜0.05)，2000mg/kg與1000mg/kg、500mg/kg比較有差異(P＜0.05)；④腦HE染色顯示染毒各組與NS組比較在1d神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)及神經(jīng)核團(tuán)無明顯變化。7d甲苯染毒各組神經(jīng)元腫脹，突起消失，空泡變性，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞可見空泡變性，數(shù)目無明顯變化。14d神經(jīng)膠質(zhì)增生，神經(jīng)核團(tuán)內(nèi)神經(jīng)元變性，大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞體聚集。Nissl硫堇染色顯示染毒各組與NS組

5、比較在1d無變化，14d甲苯染毒各組尼氏體減少，核空泡化，并隨劑量增加而嚴(yán)重；免疫組織化學(xué)顯示：ChAT免疫陽性細(xì)胞主要分布大腦皮層，1d各劑量組均未見明顯變化，7d輕度減少，14d明顯減少。GABA免疫陽性細(xì)胞在大腦皮層和海馬廣泛分布，1d、7d各劑量組未見明顯變化，14d輕度減少。Glu免疫陽性細(xì)胞1d各劑量組未見明顯變化，7d、14d減少，以14d明顯。⑤其它重要臟器表現(xiàn)肝臟：死亡小鼠肝腫大，染毒各組與NS組比較均有差異(p＜0.

6、05)，2000mg/kg組、1000mg/kg組與500mg/kg組比較有差異(p＜0.05)。HE染色顯示肝細(xì)胞空泡變性明顯，脂肪變性，細(xì)胞間隔增大，有片狀壞死，隨劑量增加而嚴(yán)重，1d變化明顯，7d部分恢復(fù)，14d接近正常；心臟：肉眼觀有輕度紅腫，HE染色顯示部分心肌細(xì)胞肌纖維溶解，心肌細(xì)胞腫脹；腎：腎臟肉眼觀有腫脹，HE染色顯示小鼠甲苯染毒各劑量組腎小管上皮細(xì)胞腫脹，部分脫落，微絨毛脫落，管腔破壞，髓質(zhì)充血，隨劑量增加而嚴(yán)重，7d

7、部分恢復(fù)，14d接近正常；肺：肺直觀無明顯異常，HE染色顯示小鼠肺細(xì)支氣管與部分肺泡腔內(nèi)可見灶性炎性壞死，中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，7d部分恢復(fù)，14d接近正常。結(jié)論：①小鼠腹腔注射甲苯發(fā)現(xiàn)具有急性毒性，LD50=1782.38mg/kg；②中毒小鼠自主活動(dòng)性降低(P＜0.05)；③肝、心、腎、肺都有不同程度的損傷，以肝損傷最為嚴(yán)重；④染毒小鼠死亡原因可能由于腦水腫、肝中毒及心臟損傷而導(dǎo)致多臟器的功能衰竭；⑤腦組織神經(jīng)元凋亡，神經(jīng)遞質(zhì)表達(dá)和含量的