急性毒性實(shí)驗(yàn)方案

1、揮發(fā)油處理：用前加 5%吐溫-80 乳化后，加蒸餾水配制成所需濃度藥液。預(yù)實(shí)驗(yàn)：取體重 18～22g 的小鼠 30 只，雌雄各半，分為空白組（2 只） ，揮發(fā)總油組（14 只） 、組分5 組（14 只） ，用苦味酸編號(hào)，禁食（不禁水）8-12h 后，腹腔注射給藥，揮發(fā)總油組給藥劑量按 0.12g/kg、0.16g/kg、0.20g/kg、0.25g/kg、0.32g/kg、0.40g/kg、0.50g/kg，組分 5 組給藥劑量按 0.

2、10g/kg、0.12g/kg、0.16g/kg、0.20g/kg、0.25g/kg、0.32g/kg、0.35g/kg、 ，空白對(duì)照組給以等體積的蒸餾水，每組兩只。給藥后各組小鼠正常飼養(yǎng)（實(shí)驗(yàn)過(guò)程中禁食、不禁水 12ｈ） ，一般給藥后 6 小時(shí)內(nèi)要密切觀察小鼠的反應(yīng)（藥后 30min 內(nèi)，連續(xù)觀察；藥后 30min-2h，每 15min 觀察 1 次；藥后 2-4h，每 30min 觀察 1 次；藥后 4-8h，每 1h 觀察 1 次

3、） ，之后每天一次，連續(xù) 7 天，每天稱(chēng)取動(dòng)物體重，記錄毛色，精神，動(dòng)度，進(jìn)食，飲水等一般情況，中毒癥狀及死亡情況，死亡動(dòng)物即時(shí)解剖，肉眼觀察心，肝，脾，肺，腎等主要臟器有無(wú)病變。7d 觀察期結(jié)束后將各組存活動(dòng)物處死，解剖，按照上述同樣方法肉眼觀察主要臟器大體病理改變。 （一般預(yù)實(shí)驗(yàn)藥物濃度比在 0.1-0.7 之間） 。正實(shí)驗(yàn)：取體重 18～22g 的小鼠 110 只，雌雄各半，分為空白組（10 只） ，揮發(fā)總油組（50 只） 、組分

4、 5 組（50 只） ，用苦味酸編號(hào)，禁食（不禁水）8-12h 后，腹腔注射給藥，揮發(fā)總油組給藥體積按 0.16g/kg、0.2g/kg、0.25g/kg、0.32g/kg、0.4g/kg，組分 5 組給藥劑量按0.12g/kg、0.16g/kg、0.20g/kg、0.25g/kg、0.32g/kg，空白對(duì)照組給以等體積的蒸餾水，每組 10 只。給藥后各組小鼠正常飼養(yǎng)（實(shí)驗(yàn)過(guò)程中禁食、不禁水 12ｈ） ，一般給藥后 8 小時(shí)內(nèi)要密切觀察

5、小鼠的反應(yīng)（藥后 30min 內(nèi)，連續(xù)觀察；藥后 30min-2h，每 15min 觀察 1次；藥后 2-4h，每 30min 觀察 1 次；藥后 4-8h，每 1h 觀察 1 次） ，之后每天一次，連續(xù)14 天，每天稱(chēng)取動(dòng)物體重，記錄毛色，精神，動(dòng)度，進(jìn)食，飲水等一般情況，中毒癥狀及死亡情況，死亡動(dòng)物即時(shí)解剖，肉眼觀察心，肝，脾，肺，腎等主要臟器有無(wú)病變。14d觀察期結(jié)束后將各組存活動(dòng)物處死，解剖，按照上述同樣方法肉眼觀察主要臟器大體

6、病理改變。數(shù)據(jù)處理：數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用 Bliss 法,應(yīng)用 SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)算 LD50 及 95％可信限。 劑量設(shè)計(jì)：華細(xì)辛油給小鼠腹腔注射的 LD50 為 0.25g/kg。在預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上確定各組小鼠用藥量，相鄰的兩組間劑量的比值 r=0.8。小鼠腹腔注射的給藥容積一般為 5 ml/kg。小鼠腹腔注射可以用 1 ml 的注射器，配合 4 號(hào)針頭。毒性評(píng)價(jià)：并于給藥前后每天進(jìn)行 1 次體質(zhì)量測(cè)定，第 14

7、d 處死小鼠，對(duì)小鼠進(jìn)行大體剖檢，肉眼觀察各臟器有無(wú)異常，如有肉眼可見(jiàn)病變，進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。 程度 癥狀 無(wú)毒 未見(jiàn)毒性癥狀輕度毒性 輕度癥狀，不安但無(wú)運(yùn)動(dòng)減少，呼吸困難或腹部刺激癥狀明顯毒性 有腹部刺激癥狀、呼吸困難、