獸藥殘留分析技術(shù)進展

1、獸藥殘留分析技術(shù) 與殘留檢測實驗室建設(shè),第一部分 獸藥殘留及其危害,獸藥,典型的獸藥是指用于預(yù)防和治療畜禽疾病的藥物。隨著集約化養(yǎng)殖生產(chǎn)的開展，一些化學(xué)的、生物的藥用成分被開發(fā)成具有某些功效的動物保健品或飼料添加劑，也屬于獸藥的范疇。獸藥的主要用于防病治病、促進生長、提高生產(chǎn)性能、改善動物性食品的品質(zhì)等。,獸藥在動物性食品中的殘留,獸藥的原形化合物及其代謝物在動物的細胞、組織、器官或可食性產(chǎn)品（如

2、奶、蛋）中的蓄積、貯存，稱為食品動物的獸藥殘留。（狹義）化學(xué)物殘留：除獸藥外還包括通過食物鏈進入動物體內(nèi)的農(nóng)藥（如殺蟲劑、除草劑等）和環(huán)境污染物(如重金屬、霉菌毒素等)。（廣義）,獸藥在生態(tài)環(huán)境中的殘留,在生產(chǎn)中大量使用的抗菌藥物、抗寄生蟲藥物及各種促生長制劑等藥物都會以原形或以有活性的代謝產(chǎn)物形式隨動物糞便、尿液或其他排泄物進入環(huán)境。這些物質(zhì)在環(huán)境土壤、微生物、水生生物、植物等蓄積或貯存。,獸藥殘留的產(chǎn)生,外因獸藥和添加劑的

3、使用 --防治動物疫病 --使用藥物添加劑環(huán)境污染物內(nèi)因獸藥的體內(nèi)過程 --消除規(guī)律,獸藥殘留的產(chǎn)生,獸藥殘留產(chǎn)生的主要原因不遵守休藥期的規(guī)定標簽外用藥 --劑量、劑型、給藥途徑、療程、適應(yīng)癥、動物非法使用違禁藥物污染 --飼料加工、貯藏、運輸,獸藥殘留的危害,急性毒性作用（瘦肉精）慢性毒性作用（氯霉素、氨基糖苷類）特殊毒性作用（三致作用、激素樣作用、過敏反應(yīng)） --

4、雌激素類（己烯雌酚）、同化激素（苯丙酸諾龍）--喹惡啉類（卡巴氧）--硝基呋喃類（呋喃西林、呋喃它酮）--砷制劑--苯并咪唑類--殺蟲劑（666）--氯羥吡啶、SM2等--甲醛、苯酚等,獸藥殘留的危害,對人類腸道微生物的影響 --破壞或抑制人體胃腸菌群中敏感菌的生長 --導(dǎo)致條件性病原菌的大量繁殖或體外病原菌侵入腸道 --改變腸道菌群的代謝活性，使菌群改變藥物和食物固有活性和毒性的的生物轉(zhuǎn)化能力發(fā)生變化

5、--引起細菌耐藥性的產(chǎn)生，導(dǎo)致人類感染性疾病治療的失敗,第二部分 獸藥殘留分析技術(shù),獸藥殘留分析技術(shù)的特點,待測物質(zhì)濃度低樣品基質(zhì)復(fù)雜，干擾物質(zhì)多獸藥殘留代謝產(chǎn)物多樣或不明動物種類多樣，對藥物代謝存在差異,殘留標示物的選擇,用藥后體內(nèi)存在多個殘留成分，則需要監(jiān)控總殘留物?？倸埩粑镌隗w內(nèi)的各組分比例相對穩(wěn)定，選擇總殘留物中1種或2種組分作為“參照物”，稱為“殘留標示物”。通過測定殘留標示物的含量表示樣品殘留量和MRLs。

6、選擇殘留標示物的原則 --消除慢、含量高、穩(wěn)定、毒性大,獸藥殘留分析方法的要求,快速高通量定量準確度和精確度確證法定要求質(zhì)控要求,獸藥殘留分析方法的要求,ELISA,LC/MS/MS,,,,,LC or GC,,分析方法的總體思路,高水平(Level Ⅰ)方法 --確證和定量被分析物質(zhì) 中等水平(Level Ⅱ)方法 --定量但不需要確證被分析物質(zhì)低水平(Level Ⅲ)方法 --篩選,分析方法的

7、總體思路,采用快速、大量檢測樣品的篩選分析方法，能鑒別含有殘留物的陽性樣品,采用充分可靠的分析方法，殘留量的值不具有確證性，但具相應(yīng)的準確度和有效性,采用經(jīng)過確認的分析方法對殘留物進行鑒別和測定，殘留量的值必須是有效和肯定的,,,酶聯(lián)免疫法,液相色譜法氣相色譜法,液質(zhì)聯(lián)用法氣質(zhì)聯(lián)用法,,,,,,三級,二級,一級,“篩選”到“確證”的方法體系,定性定量,三級方法,二級方法,一級方法,定性為主,定量為主,定性為輔,GC/MS

8、,LC/MS,GC,HPLC,獸藥殘留分析技術(shù),用于殘留分析的樣本制備技術(shù)樣品的前處理技術(shù)殘留檢測方法的選擇,樣本的范圍,可食性組織及產(chǎn)品 --肝、腎、肌肉、脂肪、皮膚、血液 --奶、蛋 --其他加工食品其他 --毛發(fā)、尿、糞便等,樣本的收集,取樣方法 --代表性原則、隨機采樣 --各種標準規(guī)定活體檢測 --一般采集毛發(fā)、血液、尿液和糞便屠宰場取樣 --藥物的靶組織 --其他高濃度的樣

9、本：肝、腎、膽汁、注射部位 --排泄物：尿液,樣本的貯存,容器材料 --一般為玻璃或塑料預(yù)處理 --勻化、縮分、過篩、離心、過濾、防腐、抑制降解等貯存溫度要求,樣品前處理技術(shù),提取方法 --組織搗碎法 --振蕩法凈化方法 --液—液萃取 --液—固萃取濃縮與富集 --旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮 --氣流吹蒸法：氮氣、空氣,樣品的前處理技術(shù)——提取,提取,化合物特性,基質(zhì)組成,提取劑選擇,沉淀劑選擇

10、,設(shè)計順序,效率試驗配比試驗,干擾試驗影響凈化,樣品的前處理技術(shù)——凈化,凈化,液液萃取,SPE純化,相似相溶,小柱選擇,濃縮富集,效率試驗配比試驗,上樣洗滌洗脫,殘留檢測方法簡介,快速篩選方法 --酶免疫測定(EIA) --ELISA --放射免疫測定法(RIA) --金標試紙條(Dip stick) --生物傳感器 --微生物抑制測定法：抗菌藥 --TLC,殘留檢測方法簡介,化學(xué)定量方法 -

11、-氣相色譜法（GC） --高效液相色譜法（HPLC） --原子熒光(AF) --原子吸收(AA),殘留檢測方法簡介,儀器確證方法 --HPLC-PDA --GC-MS --GC-MS-MS --HPLC-MS --LC-MS-MS,樣品處理技術(shù)進展,SPE的應(yīng)用與自動化膜分離技術(shù)免疫親和色譜(IAC)凝膠滲透色譜（GPC）分子印跡技術(shù)其他技術(shù)（自動索氏提取法、超聲波輔助提取、超臨界流體萃取、強化

12、溶劑萃取、微波輔助萃取、加速溶劑萃取法）,色譜分析技術(shù)進展,超高效液相色譜系統(tǒng)(UPLC),色譜分析技術(shù)進展,高效毛細管電泳色譜系統(tǒng)(HPCE),色譜分析技術(shù)進展,高精密度串聯(lián)質(zhì)譜——GC-MS/MS、LC-MS/MS,色譜分析技術(shù)進展,高精密度串聯(lián)質(zhì)譜——GC-MS/MS,色譜分析技術(shù)進展,高精密度串聯(lián)質(zhì)譜——LC-MS/MS,色譜分析技術(shù)進展,高分辨質(zhì)譜系統(tǒng)(Q-TOF、Q-Exactive),檢測技術(shù)發(fā)展趨勢分析,檢測方法,篩選方

13、法,確證方法,快速簡便,價格便宜,現(xiàn)場應(yīng)用,注重時效性,儀器更新快,多組分分析,靈敏度高,提高準確性,限制我國殘留檢測發(fā)展的問題,問題：標準依賴性強，但標準滯后?！獦藴手菩抻喅绦蚧?、效應(yīng)化,導(dǎo)致：標準實施效果較差?！獦藴食雠_后很快又被淘汰——現(xiàn)有標準限制了檢測技術(shù)發(fā)展,限制我國殘留檢測發(fā)展的問題,問題：照搬國外的殘留監(jiān)控內(nèi)容?！獧z測方法缺乏驗證——缺乏藥理研究，沒有“中國特色”的MRL,導(dǎo)致：殘留檢測基礎(chǔ)較差?！獙Σ?/p>

14、同藥物的殘留關(guān)注程度不一,警惕殘留檢測發(fā)展的誤區(qū),誤區(qū)一：“兩極”分化,檢測方法,篩選方法,確證方法,成本上升,一物多用,注重首創(chuàng),忽略了篩選方法的初衷,儀器追新型,盲目多殘留,水平看指標,過猶不及不切實際,沒有聯(lián)系,警惕殘留檢測發(fā)展的誤區(qū),誤區(qū)二：習(xí)慣“參考”,方法可行,數(shù)據(jù)可信,撰稿發(fā)表,內(nèi)容相似,知其然，而不知所以然,難以提升自身水平,警惕殘留檢測發(fā)展的誤區(qū),誤區(qū)三：只認“原形”,藥物,藥物原形,代謝物,缺乏藥代動力學(xué)研

15、究，盲目檢測,正確引導(dǎo)殘留檢測發(fā)展方向,積極研究藥物代謝和殘留消除規(guī)律,藥理學(xué),藥效研究,藥代研究,藥物對機體的實際作用,機體內(nèi)藥物的生物轉(zhuǎn)化,藥物的生物利用度,藥物的標示殘留物,藥物劑型研究,消除規(guī)律研究,確定監(jiān)控的靶點,制定休藥期,危險性評估,正確引導(dǎo)殘留檢測發(fā)展方向,重視飼料投入品的調(diào)查和監(jiān)測,飼料藥物添加劑,國外引進,人用藥品,企業(yè)自創(chuàng),禁用化合物清單,允許添加的藥物,出現(xiàn)干擾物質(zhì),有特征組分,未知組分分析,新添加物,第三部分

16、 殘留檢測實驗室建設(shè),殘留實驗室的功能,動物性食品中獸藥殘留檢測飼料產(chǎn)品中違禁藥物(危害物質(zhì))檢測殘留分析技術(shù)的推廣應(yīng)用殘留分析技術(shù)的研發(fā)和標準化工作,殘留實驗室的建設(shè)要求,硬件要求 —實驗場地、格局、設(shè)施 —設(shè)備、標準物質(zhì)、試劑耗材 —人員軟件要求 —資質(zhì)認證與管理體系建設(shè),實驗室建設(shè)的硬件要求,實驗場地和格局面積要大。根據(jù)具體功能分割，不同實驗室要求不一。 （天平

17、室不宜太大，儀器室不宜太?。└鶕?jù)實驗流程分割。明確每個實驗室名稱，避免功能混亂。,功能實驗室,樣品保存室天平室（稱量）樣品預(yù)處理室（組織勻漿、飼料粉碎、分樣）樣品檢測室（ELISA檢測）儀器分析室（大型儀器設(shè)備）清洗消毒室試劑保存室（危險化學(xué)品）耗材保存室標準物質(zhì)保存室,實驗室建設(shè)的硬件要求,必要設(shè)施安全設(shè)施：消防裝置、報警裝置等。環(huán)境設(shè)施：空調(diào)、通風(fēng)柜、排氣扇、去濕機等。防護設(shè)施：醫(yī)藥箱、沖淋裝置

18、。三廢收集與處理設(shè)施。,實驗室建設(shè)的硬件要求,設(shè)備(按流程分類)樣本的保存設(shè)備：冰箱、培養(yǎng)箱等。樣品前處理設(shè)備：勻漿機、粉碎機、濃縮儀等。檢測用設(shè)備：酶標儀、HPLC、LC-MS/MS等。設(shè)備(按功能分類)主要設(shè)備：出具檢測數(shù)據(jù)。輔助設(shè)備：對檢測數(shù)據(jù)有一定的影響。,主要檢測用儀器設(shè)備,主要檢測項目,實驗室建設(shè)的硬件要求,標準物質(zhì) —標準品和對照品 —標準溶液常用試劑 —水 —固體試劑

19、 —液體試劑專用試劑 —試劑盒,實驗室建設(shè)的硬件要求,常用耗材玻璃儀器（包括小容量玻璃儀器）塑料制品（離心管、槍頭等一次性用品）防護用品（手套、護目鏡等）專用耗材色譜耗材（色譜柱、樣品瓶等）前處理耗材（SPE小柱、濾膜等）保存用耗材(密封袋、標準溶液瓶),實驗室建設(shè)的硬件要求,人員了解行業(yè)動態(tài)，關(guān)注食品安全。沒有固定專業(yè)要求，但要有化學(xué)實驗基礎(chǔ)。大型儀器要盡量配備具有操作經(jīng)驗的人員。有較高的結(jié)

20、果分析能力和判斷能力。,實驗室建設(shè)的軟件要求,資質(zhì)認證與實驗室管理體系建設(shè),實驗室建設(shè)的軟件要求,《檢測和校準實驗室能力的通用要求》25要素,組織管理體系文件控制要求、標書和合同評審分包服務(wù)和供應(yīng)品采購服務(wù)客戶投訴不符合檢測工作的控制記錄控制改進糾正措施預(yù)防措施內(nèi)部審核管理評審,,管理要素,,技術(shù)要素,總則人員設(shè)施和環(huán)境條件檢測方法及方法的確認設(shè)備測量溯源性抽樣樣品處置檢測結(jié)果質(zhì)量保證結(jié)果報