玉米鐵氧還蛋白-硫氧還蛋白系統(tǒng)相關(guān)蛋白表達(dá)及功能分析.pdf

1、植物葉綠體光合作用的氧化還原信號(hào)主要的系統(tǒng)是鐵硫氧還蛋白系統(tǒng)，包括硫氧還蛋白（thioredoxin，Trx）和它的還原酶：鐵硫氧還蛋白還原酶(ferredoxin/thioredoxinreductase，F(xiàn)TR)和鐵氧還蛋白(ferredoxin，F(xiàn)d)，后兩者催化Trx保持還原態(tài)。本文研究了重組玉米Trx、FTR和Fd的性質(zhì)。獲得如下主要結(jié)果：
　　 1．純化的重組玉米m型和f型Trx的等電點(diǎn)分別為4.6和5.9。m型Tr

2、x比f(wàn)型Trx有更強(qiáng)的還原胰島素二硫鍵的能力，而突變體蛋白幾乎沒(méi)有還原能力。用Cys殘基專一性標(biāo)記化合物AMS標(biāo)記Trx，顯示野生型Trx有氧化還原態(tài)，而突變體蛋白僅有還原態(tài)。SDS-PAGE電泳顯示固定化的f型Trx突變體比m型Trx突變體捕獲的玉米幼葉靶蛋白更具有多樣性。
　　 2．提取玉米幼葉總RNA，以此為模板，RT-PCR克隆FTR可變亞基和催化亞基的編碼基因，插入兩種大腸桿菌表達(dá)載體，表達(dá)的蛋白分別含有His-tag

3、和HisSUMO-tag，其中可變亞基除去N端20個(gè)氨基酸殘基，在大腸桿菌中表達(dá)和純化了兩個(gè)蛋白亞基，除去HisSUMO-tag，SDS-PAGE顯示純化的蛋白為一條帶，表明除去N端部分氨基酸殘基后，可變亞基FTRA穩(wěn)定性增加。
　　 3.RT-PCR克隆了Fd1的編碼基因，分別插入pQE80和p28SUMO載體。純化的鐵氧還蛋白SDS-PAGE顯示純化的蛋白為一條主帶，蛋白呈現(xiàn)棕紅色，紫外可見(jiàn)光譜掃描，在315nm，415nm