B亞群禽白血病病毒分離株的生物學(xué)特性.pdf

1、禽白血病是由禽白血病病毒和禽肉瘤病病毒引起的禽類多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱。禽白血病病毒是在雞群中普遍存在的一群反轉(zhuǎn)錄病毒，該病毒可引起禽的多種具有傳染性的良性腫瘤和惡性腫瘤。根據(jù)在不同遺傳型雞胚成纖維細(xì)胞上的宿主范圍、與相同或不同亞群成員的干擾模式以及用病毒-清中和試驗(yàn)鑒定的病毒囊膜抗原，雞的禽白血病病毒可分為A、B、C、D、E和J共6個(gè)亞群。其中A、B、C、D主要引起經(jīng)典的淋巴樣白血病，而J亞群主要引發(fā)髓樣細(xì)胞瘤。在過去十年中，中國已對J

2、亞群ALV的流行狀況有了大量報(bào)道，由于中國在過去幾十年中從未對ALV采取過有效的凈化措施，中國雞群、尤其地方品系中存在其它亞型ALV感染的可能性很大。但對J亞群以外其它亞群ALV還很少有研究。
　　 1.B亞群ALV野毒株SDAU09C2的分離和鑒定
　　 本文通過接種DF-1細(xì)胞（C/E）系，從山東某地方品系蘆花雞的雞群中分離到一株外源性白血病病毒（ALV）SDAU09C2。根據(jù)GenBank中已發(fā)表不同亞群序列設(shè)計(jì)合

3、成7對連續(xù)、相互部分重疊的引物，完成了該外源性禽白血病病毒分離株SDAU09C2的前病毒全基因組核苷酸序列，并與A、B、C、D、E、J亞群參考毒株進(jìn)行了同源性分析。分析結(jié)果表明，該分離毒株gp85氨基酸序列與ALV-B的四株參考株的同源性最高，92.5％-95.1％之間，而與其他亞群的同源性在78.9-89.9％之間，與J亞群參考株的同源性更是低至36.9％-39.5％，因此將此分離毒株劃歸為B亞群。
　　 將其gag、pol基

4、因與其它各亞群參考毒株進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)該分離毒株與各亞群毒株的同源性均在95％以上，實(shí)際上這兩個(gè)基因在各個(gè)亞群之間非常保守。
　　 gp37基因編碼的氨基酸序列同源性比較發(fā)現(xiàn)，雖然SDAU09C2屬于B亞群ALV，但是其gp37卻與ALV-A的MAV-1具有極高的同源性，說明gp37的同源性與亞群沒有明確相關(guān)性。
　　 SDAU09C2的R區(qū)域與其它各亞群的同源性在80.0％-100.0％之間。U5區(qū)域與各亞群參考株相應(yīng)序

5、列同源性比較發(fā)現(xiàn)，其與外源性A、B、C、D、J亞群的同源性在90.0％以上，與E亞群的同源性在85.9％-87.5％，說明R和U5序列與ALV的亞群沒有相關(guān)性。將SDAU09C2的U3序列與其它各亞群U3序列比較發(fā)現(xiàn)，SDAU09C2的U3序列與ALV-A參考株MQNCSU株的同源性最高，為91.1％，與ALV-B參考株RSR B和MAV-2的同源性分別為84.4％和36.1％，這說明不同毒株之間U3序列的同源性與毒株所屬亞群同樣沒有直

6、接的相關(guān)性。
　　 通過分析調(diào)控元件發(fā)現(xiàn)，SDAU09C2的U3序列調(diào)控元件與MQNCSU沒有差異，而與B亞群RSR B株相比，SDAU09C2多出1個(gè)增強(qiáng)子序列CAAT box和1個(gè)CArG box，但缺少了一個(gè)PRE box。
　　 2.SDAU09C2株對不同品種雞的致病性比較
　　 本研究通過動(dòng)物試驗(yàn)比較了SDAU09C2株對不同品種雞的致病性。由于本實(shí)驗(yàn)室的前期試驗(yàn)中對J亞群分子化克隆毒株NX0101的

7、致病性等已進(jìn)行了深入研究，因此采用NX0101株作為對照毒株。兩個(gè)毒株在三種雞（白來航SPF雞、HN蛋雞、地方品系蘆花雞）中均采用雞胚接種的方式。動(dòng)物試驗(yàn)的比較分析結(jié)果如下：
　　 2.1兩株ALV腫瘤發(fā)生率的比較
　　 自出殼20周后，SDAU09C2毒株和NX0101毒株開始誘發(fā)產(chǎn)生腫瘤。截止目前，兩株病毒均在SPF雞中誘發(fā)腫瘤，發(fā)生率分別為8.7％和14.3％，在HN蛋雞中只有SDAU09C2引發(fā)腫瘤，發(fā)生率為5.

8、6％，而兩株病毒均未在蘆花雞中引發(fā)腫瘤。兩株病毒均可在不同部位引發(fā)多種類型腫瘤，SDAU09C2在目前誘發(fā)的腫瘤中多表現(xiàn)為血管瘤，另外還有卵巢和腸系膜的腫瘤，說明該B亞群毒株具有一定的致病性；而NX0101則誘發(fā)包括血管瘤、纖維肉瘤及彌漫性腫瘤在內(nèi)的不同部位的多種類型腫瘤。
　　 2.2兩株ALV在不同品種雞中病毒血癥檢出率的比較
　　 白來航SPF雞和HN蛋雞中，兩株病毒均在1-3周之內(nèi)即可檢測到病毒血癥，特別是白來航

9、SPF雞，在3周時(shí)9/10的雞可檢測到病毒血癥。SDAU09C2在這兩種雞中的橫向感染能力強(qiáng)于NX0101。地方品系蘆花雞中，SDAU09C2接種的雞只在5周時(shí)檢測到一過性病毒血癥，且陽性比例不高（2/12）。橫向感染組病毒血癥檢測表明，SDAU09C2在蘆花雞中的橫向傳播能力弱于其在自來航SPF雞和HN蛋雞中的橫向傳播能力。
　　 2.3兩株ALV在不同品種雞中泄殖腔棉拭子p27檢出率的比較
　　 白來航SPF雞和HN

10、蛋雞中，在5-21周時(shí)SDAU09C2接種雞泄殖腔棉拭子p27陽性檢出率高于NX0101接種組。SDAU09C2在這兩種雞中的橫向感染能力強(qiáng)于NX0101。地方品系蘆花雞中，在5-21周時(shí)NX0101接種組泄殖腔棉拭子p27陽性檢出率高于SDAU09C2接種組。兩株病毒在蘆花雞中的橫向傳播能力均弱于白來航SPF雞和HN蛋雞。
　　 2.4兩株ALV在不同品種雞中對體重抑制作用的比較
　　 SDAU09C2和NX0101均

11、可對3個(gè)品種雞的增重產(chǎn)生抑制作用。在HN蛋雞中，SDAU09C2株的對體重增重的抑制作用強(qiáng)于NX0101株。但是在自來航SPF雞中，SDAU09C2的抑制作用則弱于NX0101株。在地方品系蘆花雞中，SDAU09C2對體重的抑制作用略強(qiáng)于NX0101，但兩株病毒對體重的抑制效果均弱于在另外2種雞中的抑制效果。
　　 2.5兩株ALV在不同品種雞中免疫抑制作用的比較
　　 對NDV，AIV-H5，AIV-H9滅活免疫后35

12、d的HI抗體的滴度的比較表明，SDAU09C2株可在自來航SPF雞及蘆花雞中對NDV的抗體反應(yīng)顯示一定的免疫抑制作用，而在HN蛋用型雞則沒有免疫抑制作用。該株病毒在三個(gè)品種的雞對AIV-H5和AIV-H9的抗體反應(yīng)則無影響。與SDAU09C2株不同，J亞群的NX0101株在三個(gè)品種雞對三種病毒的抗體反應(yīng)都不表現(xiàn)明顯的免疫抑制作用。
　　 出殼后6周隨機(jī)剖殺，觀察病毒對免疫器官發(fā)育的抑制作用。在白來航SPF雞中，兩株病毒均對法氏囊

13、的發(fā)育產(chǎn)生明顯的抑制作用；在蛋雞中，SDAU09C2對胸腺及法氏囊的發(fā)育均具有抑制作用，而NX0101則未對三種免疫器官的發(fā)育表現(xiàn)抑制作用；在蘆花雞中，NX0101對法氏囊的發(fā)育具有抑制作用，而SDAU09C2則未對三種免疫器官的發(fā)育產(chǎn)生影響。兩株病毒在三個(gè)品種雞中均未對脾臟的發(fā)育產(chǎn)生抑制作用。
　　 2.6兩株ALV在不同品種雞中其它檢測指標(biāo)的比較
　　 2.6.1特異性抗體的檢測
　　 兩株病毒均可在3種雞接

14、種組和橫向感染組誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體，但是在白來航SPF雞和HN蛋雞中抗體水平和檢出率均高于蘆花雞。
　　 2.6.2對雞蛋的相關(guān)檢測
　　 目前只有蛋雞試驗(yàn)組全部開產(chǎn)。雞蛋的檢測結(jié)果說明，兩株病毒接種雞所產(chǎn)蛋中可在蛋清中檢測到p27抗原及卵黃抗體。SDAU09C2株兩者的檢出率均高于NX0101株。
　　 2.6.3血液常規(guī)指標(biāo)的檢測
　　 在連續(xù)的跟蹤監(jiān)測過程中，兩株病毒可使血液中白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)輕微變化，