J亞群禽白血病病毒嵌合多表位基因釀酒酵母表面展示.pdf

1、禽白血病(Avian Leukosis，AL)是指由反轉(zhuǎn)錄病毒科甲型反轉(zhuǎn)錄病毒屬禽反轉(zhuǎn)錄病毒引起的以禽類造血組織中某些細(xì)胞成分過(guò)度增生為主的各種具有傳染性的腫瘤性疾病，是世界性分布的禽腫瘤性傳染病，嚴(yán)重制約養(yǎng)禽業(yè)發(fā)展的重要疫病之一。自1911年發(fā)現(xiàn)以來(lái)，ALV(Avian Leukosis Virus)成為研究腫瘤性傳染病發(fā)病機(jī)理的重要模型，針對(duì)它的研究一直受到各國(guó)科學(xué)家的重視。由于該病毒涵蓋多種亞群，同一亞群又有不同毒株，以及相關(guān)的內(nèi)

2、源性病毒的廣泛存在，造成本病的防控難度大大增加。西方發(fā)達(dá)國(guó)家由于養(yǎng)殖模式和管理方式等方面的優(yōu)勢(shì)，通過(guò)幾十年的努力，對(duì)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)ALV的感染基本實(shí)現(xiàn)了凈化。但是，近年來(lái)，ALV-J（J亞群禽白血病病毒）在我國(guó)的發(fā)生和蔓延卻呈現(xiàn)愈演愈烈的情形，不斷有我國(guó)白羽雞群和地方種雞發(fā)生ALV-J感染的報(bào)道，ALV-J感染的發(fā)病日齡也呈現(xiàn)提前的趨勢(shì)，并且首次發(fā)現(xiàn)了急性致瘤性ALV-J引發(fā)急性纖維肉瘤的自然感染的病例。ALV-J對(duì)我國(guó)禽業(yè)發(fā)展已造成嚴(yán)重

3、威脅，針對(duì)規(guī)模化雞場(chǎng)進(jìn)行ALV的凈化已成為我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)當(dāng)前的重要任務(wù)，但是，由于我國(guó)地緣遼闊、雞群品系繁多、養(yǎng)殖條件參差不齊等原因，實(shí)現(xiàn)ALV全面的凈化任重道遠(yuǎn)。許多學(xué)者嘗試從分子生物學(xué)的角度研發(fā)ALV的疫苗降低ALV在雞群的感染率，以期加速ALV的凈化腳步。
　　多表位疫苗(Multi-epitope Vaccine)是利用分子生物學(xué)和計(jì)算機(jī)科學(xué)分析、篩選、獲取目標(biāo)抗原中的優(yōu)秀抗原表位，將多個(gè)理想的抗原表位優(yōu)化并串聯(lián)研制出的一種新

4、型疫苗。這種疫苗尤其適用于基因容易突變或者基因組中存在癌基因的病毒，如人類免疫缺陷病毒(HIV)、禽白血病病毒(ALV)。通過(guò)分析并獲得這些病毒的抗原性和保守性都比較強(qiáng)的抗原表位研制多表位疫苗是攻克這些腫瘤疾病的重要方向。
　　釀酒酵母表面展示系統(tǒng)（Saccharomyces Cerevisiae Surface Display System）作為一種真核表達(dá)系統(tǒng)，越來(lái)越受到關(guān)注，在抗原抗體篩選、蛋白定向進(jìn)化、水體凈化和活載體疫苗

5、等方面得到廣泛的應(yīng)用。相比大腸桿菌、沙門氏菌等，釀酒酵母被公認(rèn)為是安全無(wú)毒（GRAS，Generally Recognized as Safe）的食品級(jí)工業(yè)菌，廣泛用于食品發(fā)酵、制藥工程和畜禽飼料等領(lǐng)域，酵母的真核表達(dá)系統(tǒng)的翻譯后修飾比細(xì)菌更具優(yōu)勢(shì)。
　　本研究主要是利用酵母表面展示系統(tǒng)和多表位疫苗相關(guān)技術(shù)，通過(guò)已發(fā)表的關(guān)于ALV-J病毒結(jié)構(gòu)的研究結(jié)果和生物信息軟件等篩選出ALV-J中保守性和抗原性較好的表位基因Gag(278-3

6、76aa)，Pol(784-855aa)，Env(Gp85:145-156aa和Gp37:412-538aa)片段串聯(lián)為多表位基因X，使用EBY100/pCTCON2酵母表面展示系統(tǒng)，構(gòu)建了ALV-J嵌合多表位基因釀酒酵母表面展示載體EBY100/pCTCON2-X，并對(duì)嵌合多表位基因X在酵母細(xì)胞表面的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)。
　　結(jié)果表明，本研究成功構(gòu)建了ALV-J嵌合多表位基因酵母表面展示載體，經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)表達(dá)，在酵母細(xì)胞表面成功展示