小梅山公豬生后生殖軸神經(jīng)介素S及其受體的發(fā)育性變化.pdf

1、神經(jīng)介素S(Neuromedin S，NMS)是2005年分離純化得到的一種新的神經(jīng)肽，為G蛋白偶聯(lián)受體NMUR-1(FM-3/GPR66)和NMUR-2(FM-4/TGR-1)的內(nèi)源性配體，廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)及外周組織。近年來的研究證實，NMS主要通過其受體在動物體內(nèi)發(fā)揮生理調(diào)節(jié)作用，包括神經(jīng)內(nèi)分泌、晝夜節(jié)律、能量代謝、應(yīng)激和動物攝食等方面。到目前為止，關(guān)于NMS對家畜生殖功能調(diào)節(jié)方面的研究報道較少，并且文獻中未見有NMS對公豬生

2、殖調(diào)控的研究報道。本文以3d、30d、60 d、90 d、120 d的小梅山公豬為研究對象，通過熒光定量PCR和免疫組織化學(xué)技術(shù)，探索了出小梅山公豬生后生殖軸中NMS及其受體的發(fā)育性變化。結(jié)果如下:
　　 1、小梅山公豬NMS及其受體基因的克隆與分析本實驗采用同源克隆技術(shù)克隆了小梅山公豬NMS及其受體(NMUR-1和NMUR-2)基因序列，并進行了生物信息學(xué)分析。結(jié)果顯示，小梅山豬NMS前體蛋白原與其他物種在結(jié)構(gòu)上十分保守，但與

3、其他物種相比缺失了12個氨基酸。NMUR-1和NMUR-2的核苷酸和氨基酸序列與其它物種相比均具有較高的同源性。
　　 2、小梅山公豬生后生殖軸NMS及其受體NMUR-2 mRNA的發(fā)育性變化采用熒光定量PCR技術(shù)檢測了隨機選取的生后3d、30d、60 d、90 d、120 d五個不同日齡小梅山公豬下丘腦、垂體和睪丸三種組織中NMS和NMUR-2 mRNA表達豐度的變化。結(jié)果顯示，NMS及NMUR-2 mRNA在小梅山公豬生后下

4、丘腦、垂體、睪丸中都有表達，且呈現(xiàn)波動性變化。在下丘腦中，NMS及NMUR-2 mRNA都呈現(xiàn)逐步升高的趨勢，且于90 d豐度最高，120 d開始下降。但NMS mRNA60 d時豐度略低于30d，而NMUR-2mRNA在60 d時豐度高于30d。在垂體中，NMS及NMUR-2mRNA變化趨勢不同，NMS呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，其中60 d豐度最低，120 d豐度最高。而NMUR-2呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢，其中60 d豐度最高。在睪丸中

5、，NMS總體呈現(xiàn)逐步升高的趨勢，但60 d豐度明顯低于其它d，而NMUR-2呈現(xiàn)先降低后升高的趨勢，60 d豐度最低，90 d豐度最高。
　　 3、小梅山公豬生后下丘腦和睪丸組織中NMUR-2蛋白的發(fā)育性變化采用免疫組化技術(shù)檢測了小梅山公豬生后下丘腦和睪丸組織中NMUR-2蛋白的發(fā)育性變化。結(jié)果顯示:NMUR-2免疫陽性細胞主要存在于生后各個日齡小梅山公豬下丘腦室旁核和睪丸間質(zhì)細胞中。在下丘腦室旁核中，隨著日齡的增長，NMUR-

6、2陽性細胞不斷增大，數(shù)量不斷增多，其中在60～90 d時變化最明顯。在睪丸中，生后30d到60 d，睪丸間質(zhì)細胞數(shù)量明顯減少，但免疫陽性明顯增強，90 d和120 d時NMUR-2免疫陽性反應(yīng)與60 d相似。
　　 本實驗從基因和蛋白水平，研究了小梅山公豬生后各個階段NMS及其受體NMUR-2的發(fā)育性變化。結(jié)果表明，NMS及其受體NMUR-2在小梅山公豬生后生殖軸發(fā)育過程中呈現(xiàn)發(fā)育性變化，提示NMS及其受體NMUR-2在生殖軸發(fā)