小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)具有功能性白細(xì)胞介素-21受體的研究.pdf

1、目的：
　　小膠質(zhì)細(xì)胞是常駐中樞神經(jīng)系統(tǒng)單核吞噬細(xì)胞家族的成員之一。參與腦內(nèi)的固有免疫反應(yīng)，而且能早于外周白細(xì)胞的滲透成為中樞神經(jīng)系統(tǒng)抵御病原體入侵的第一防線。小膠質(zhì)細(xì)胞也能作為抗原提呈細(xì)胞，刺激T細(xì)胞活化、增殖。小膠質(zhì)細(xì)胞可以產(chǎn)生多種細(xì)胞因子和趨化性細(xì)胞因子啟動(dòng)或促進(jìn)炎癥反應(yīng)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的進(jìn)程，也能夠表達(dá)許多細(xì)胞因子受體和趨化性細(xì)胞因子受體，這些受體的平衡在誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞的免疫功能上起到?jīng)Q定性作用。
　　IL-2

2、1是新近發(fā)現(xiàn)的活化T細(xì)胞產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子，近年來與其相關(guān)的研究倍受關(guān)注。IL-21與其受體結(jié)合后，能夠調(diào)節(jié)T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等增殖和細(xì)胞因子的分泌，參與機(jī)體的天然免疫及獲得性免疫。已有多項(xiàng)報(bào)道證實(shí)IL-21在免疫相關(guān)疾病的發(fā)病中發(fā)揮著重要作用。
　　目前，關(guān)于小膠質(zhì)細(xì)胞是否表達(dá)IL-21受體的研究尚未見報(bào)道。如果小膠質(zhì)細(xì)胞能夠表達(dá)功能性IL-21受體，將可能為中樞神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性疾病、腦卒中及神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的治療

3、提供新的線索。本研究目的是探討小膠質(zhì)細(xì)胞是否表達(dá)IL-21受體，研究IL-21/IL-21受體通路在小膠質(zhì)細(xì)胞增殖、形態(tài)學(xué)改變及細(xì)胞因子分泌過程中的作用，并進(jìn)一步研究參與其作用的分子信號(hào)通路。
　　方法：
　　選取新生昆明小鼠(出生1-3天)，分離提純小膠質(zhì)細(xì)胞，應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞上IL-21受體mRNA的表達(dá)水平，并行流式細(xì)胞儀檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞表面IL-21受體表達(dá)水平，觀察IL-21對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞增殖、形態(tài)學(xué)

4、的改變及TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1、IL-10等細(xì)胞因子分泌的影響，進(jìn)一步應(yīng)用RT-PCR.技術(shù)檢測(cè)STAT3/JAK3信號(hào)通路相關(guān)基因的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　(1)通過RT-PCR和流式細(xì)胞術(shù)從基因和蛋白水平上檢測(cè)到小膠質(zhì)細(xì)胞存在IL-21受體的表達(dá)。
　　(2)體外分別應(yīng)用LPS、IL-21刺激小膠質(zhì)細(xì)胞增殖，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組比較，IL-21和LPS刺激后小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量均顯著增加(P<0.05)，并

5、且IL-21誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞增殖呈劑量依賴性。
　　(3)利用IL-21干預(yù)小膠質(zhì)細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)其可使小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)發(fā)生變化，表現(xiàn)為突起增多，體積變大。
　　(4)利用ElisaArray的方法發(fā)現(xiàn)經(jīng)過IL-21干預(yù)后，促炎細(xì)胞因子和炎癥趨化因子IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1分泌量與對(duì)照組相比均顯著增加(P<0.05)；而抗炎細(xì)胞因子IL-10分泌量與對(duì)照組相比顯著降低(P<0.05)。
　　(5)經(jīng)IL

6、-21處理后的小膠質(zhì)細(xì)胞，與對(duì)照組比較，pSTAT3和pJAK3mRNA的表達(dá)均有增加。
　　結(jié)論：
　　(1)首次證明小膠質(zhì)細(xì)胞能夠表達(dá)IL-21受體；
　　(2)IL-21能夠誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)改變，促進(jìn)細(xì)胞增殖；
　　(3)IL-21能夠激活小膠質(zhì)細(xì)胞，增加促炎細(xì)胞因子和炎癥趨化因子IL-6、IL-1β、MCP-1、TNF-α的分泌，抑制抗炎因子IL-10的分泌；
　　(4)IL-21通過激活JAK