瘦素及其受體與生長受限胎鼠肺發(fā)育間關(guān)系的初步研究.pdf

1、胎兒生長受限(Fetalgrowthrestriction，F(xiàn)GR)或稱胎兒生長遲緩(intrauterinegrowthretardation，IUGR)是指孕37周后，胎兒出生體重小于2500g；或低于同孕齡平均體重的兩個標(biāo)準(zhǔn)差；或低于同孕齡正常體重的第10百分位數(shù)。FGR是產(chǎn)科重要的并發(fā)癥之一，我國的平均發(fā)病率為6.39％。FGR圍生兒死亡率為正常胎兒的4～6倍，導(dǎo)致FGR圍生兒死亡的最主要原因是肺發(fā)育不全及其并發(fā)癥，如呼吸窘迫綜

2、合征(respiratorydistresssyndrome，RDS)、新生兒窒息、酸中毒等。而FGR圍生兒諸多急慢性肺部疾患的高發(fā)病率主要與肺臟器官發(fā)育不成熟、表面活性物質(zhì)合成分泌不足有關(guān)。 近期研究發(fā)現(xiàn)，瘦素(Leptin，Lep)與妊娠、胎兒的生長發(fā)育及產(chǎn)后哺乳等有密切關(guān)系。瘦素及其受體廣泛存在于胎兒的腦、肝、腎等多數(shù)組織器官，特別是其表達于多種動物的胎肺組織，并在胎肺發(fā)育的關(guān)鍵期即小管期、囊性期表達量劇增，這提示瘦素及其

3、受體可能參與表面活性物質(zhì)的合成和胎肺成熟過程。 瘦素通過其特異性受體——瘦素受體(Leptinreceptor，Lep-R)發(fā)揮廣泛的生物學(xué)作用，主要包括降低食欲、減少攝食、減輕體重等中樞作用，及增加能量消耗，促進生殖、造血、免疫功能，促進組織器官發(fā)育等外周作用。盡管具體作用機制尚不明了，但大量臨床資料證實，臍血的瘦素水平與胎兒體重呈正相關(guān)，F(xiàn)GR胎兒臍血瘦素水平低于正常胎兒。在FGR過程中，持續(xù)的宮內(nèi)缺血缺氧造成宮內(nèi)血氧、營養(yǎng)

4、物質(zhì)等缺乏，胎兒組織器官發(fā)育的能源不足，胎兒體重減輕、體脂減少，瘦素的產(chǎn)生相應(yīng)減少，但瘦素水平的不足又延緩了組織器官的發(fā)育，最終可能導(dǎo)致FGR胎兒組織器官發(fā)育不良、肺臟發(fā)育不成熟、表面活性物質(zhì)分泌不足。盡管不少研究認(rèn)為瘦素及其受體與胎肺發(fā)育關(guān)系密切，但FGR胎兒的瘦素及其受體表達水平與FGR胎肺發(fā)育不良的關(guān)系，目前國內(nèi)尚未見報道，仍有待闡明。 一、研究目的1、觀察正常仔鼠與FGR仔鼠不同階段肺發(fā)育組織形態(tài)學(xué)特點。 2、研

5、究瘦素及其受體在正常仔鼠與FGR仔鼠各期胎肺組織中的分布、定位及半定量表達。 3、探討瘦素及其受體與正常仔鼠與FGR仔鼠各期胎肺發(fā)育的關(guān)系。 二、材料及方法1、建立FGR動物模型：采用子宮動靜脈縮窄法。選取Sprague-Dawley(SD)大鼠，其平均孕期為21天。將孕鼠隨機分為六組：FGR組F17、F19、F21組于妊娠第16天行子宮動靜脈縮窄術(shù)，分別于孕17、19、21天剖宮取胎。正常對照組N17、N19、N21于

6、妊娠第16天行腹腔麻醉、開腹、關(guān)腹手術(shù)，分別于孕17、19、21天剖宮取胎。測量仔鼠體重、身長、肺重量、胎盤重量及仔鼠呼吸評分。 2、各發(fā)育階段仔鼠肺組織HE染色，測量肺泡腔或肺管腔面積比、肺間隔面積比，進行組織學(xué)評分，觀察評價肺發(fā)育階段及上皮細(xì)胞發(fā)育狀況。 3、各發(fā)育階段仔鼠肺組織免疫組織化學(xué)SABC法檢測瘦素及其受體的分布、定位及半定量表達。 三、結(jié)果1、子宮動靜脈縮窄術(shù)后，F(xiàn)GR組中F17組的死胎與吸收胎率

7、為3.53％，相比正常對照組中N17的2.27％，差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。FGR組F19、F21組的死胎與吸收胎率分別為20.27％、32.89％，正常對照組N19、N21組的則為2.34％、4.26％，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 F17組仔鼠平均體重為1.93±0.25g，平均身長為2.40±0.53cm，平均肺重為0.0601±0.01414g，平均胎盤重量為0.32±0.10g；N17組仔鼠平均體重為2.

8、11±0.17g，身長為2.55±0.16cm，平均肺重為0.0667±0.01155g，平均胎盤重量為0.33±0.04g；差別均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。 FGR組中F19組與F21組仔鼠平均體重分別為3.16±0.63g、4.71±0.69g；平均身長分別為3.20±0.34cm、3.96±0.24cm；平均肺重分別為0.0873±0.01489g、0.1415±0.02028g，平均胎盤重量分別為0.45±0.11g

9、、0.45±0.11g；正常對照組中N19組與N21組仔鼠平均體重分別為3.83±0.31g、5.79±0.47g；平均身長分別為3.52±0.21cm、4.31±0.12cm；平均肺重分別為0.1040±0.01350g、0.1610±0.01663g；平均胎盤重量分別為0.61±0.05g、0.74±0.08g，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 以正常同孕齡胎鼠的平均體重減去兩個標(biāo)準(zhǔn)差作為FGR的判斷標(biāo)準(zhǔn)，故按5.79-

10、0.47×2=4.85(g)為妊娠21天FGR判斷標(biāo)準(zhǔn)；按3.21g為妊娠19天FGR判斷標(biāo)準(zhǔn)；按1.77g為妊娠17天FGR判斷標(biāo)準(zhǔn)。 FGR各組F17、F19、F21組的FGR發(fā)生率分別為7.32％、69.49％、58.82％，與正常對照組N17、N19、N21組的2.33％、2.38％、4.44％相比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。 2、FGR各組F17、F19、F21組的仔鼠呼吸評分分別為1.08±0.29

11、、2.13±0.41、4.27±0.72，顯著低于對照組的1.31±0.48、2.66±0.39、4.90±0.29(P＜0.05)。FGR各組仔鼠組織學(xué)評分分別為1.10±0.27、2.17±0.38、4.21±0.35，亦均低于正常對照組N17、N19、N21組的1.34±0.45、2.79±0.42、4.76±0.22，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。 3、FGR各組F17、F19、F21組的FGR仔鼠肺泡腔或肺管腔面

12、積比分別為8.80±1.44％、20.69±4.61％、44.73±2.80％；對照組N17、N19、N21組分別為19.44±3.35％、34.84±3.43％、47.40±8.41％，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。FGR各組F17、F19、F21組的肺間隔面積比分別為91.26±1.50％、79.40±3.76％、55.47±3.14％，正常對照組N17、N19、N21組分別為77.35±2.94％、65.15±2.13％、5

13、2.62±8.40％；差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。FGR組胎肺肺間膈明顯增厚，肺泡腔或肺管腔面積減小，囊性化、肺泡化比率較低，Ⅱ型上皮細(xì)胞出現(xiàn)延遲，呈現(xiàn)相對發(fā)育延遲狀態(tài)。 4、瘦素及其受體的分布與表達：瘦素主要定位于肺上皮細(xì)胞、支氣管粘膜腺體細(xì)胞的胞漿、核膜，在血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、軟骨細(xì)胞胞漿、核膜內(nèi)少量分布；瘦素受體主要定位于Ⅱ型肺上皮細(xì)胞、支氣管粘膜腺體細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)。FGR仔鼠瘦素及其受體表達強度低于對照組(

14、P＜0.05)。FGR組與對照組的瘦素及瘦素受體的表達強度均呈正相關(guān)(r=0.81，0.84；P＜0.01)。F21與N21組雌、雄仔鼠的瘦素及瘦素受體的表達強度無明顯差異(P＞0.05)。 5、瘦素及其受體表達強度分別與新生胎鼠體重、肺重、呼吸評分、組織學(xué)評分、肺泡腔或肺管腔面積比均呈正相關(guān)(r=0.90，0.87，0.74，0.83，0.85及r=0.93，0.92，0.81，0.85，0.86；P＜0.01)，與肺間隔面積

15、比呈負(fù)相關(guān)(r=-0.79及r=-0.74；P＜0.01)。 四、結(jié)論1、本研究運用子宮動靜脈縮窄法成功制作了子宮胎盤缺血FGR模型。 2、本研究結(jié)果提示相對于正常對照組，F(xiàn)GR組胎肺肺泡膈明顯增厚，肺泡腔或肺管腔面積減小，囊性化、肺泡化比率較低，Ⅱ型上皮細(xì)胞出現(xiàn)延遲，呈現(xiàn)相對發(fā)育延遲狀態(tài)。 3、本研究結(jié)果提示正常組大鼠孕17、19、21天及FGR組孕19、21天胎肺組織均有瘦素及其受體的表達，隨孕期的進展有不斷