亞洲玉米螟二氫葉酸還原酶基因克隆與生理功能分析.pdf

1、二氫葉酸還原酶(Dihydrofolate reductase，DHFR，EC1.5.1.3)是生物體內(nèi)葉酸代謝過程的關鍵酶，利用輔酶NADPH催化二氫葉酸(Dihydrofolate， DHF)還原生成四氫葉酸（Tetrahydrofolate，THF）。THF作為一碳單位的傳遞體參與到DNA和RNA的合成、氨基酸的代謝以及DNA、蛋白質(zhì)和磷脂的甲基化反應中，對于生物體內(nèi)細胞增殖、蛋白質(zhì)的合成和甲基化反應起著極其重要的作用。因此，DH

2、FR被廣泛用作包括抗癌、抗菌、抗瘧等藥物篩選的靶標分子。亞洲玉米螟（Ostrinia furnacalis Guenée）是我國重要的農(nóng)業(yè)害蟲，由于其鉆蛀特性，防治困難。對其二氫葉酸還原酶的表達水平和生理功能的研究，有助于明確DHFR在其生長發(fā)育過程中的作用，以達到對玉米螟進行有效防治的目的。
　　本論文以亞洲玉米螟為研究對象，首先獲得其二氫葉酸還原酶的基因序列;獲得了二氫葉酸還原酶基因在玉米螟不同發(fā)育時期和不同組織部位的表達模式

3、;利用RNA干擾技術，分析了DHFR在玉米螟生長發(fā)育和生殖方面的生理功能;分析了喂食抑制劑對玉米螟生長發(fā)育的影響。本論文的工作獲得了如下結(jié)果:
　　（一）亞洲玉米螟OfDHFR cDNA的調(diào)取:獲得的cDNA總長度為794 bp，其中編碼區(qū):558bp，編碼185個氨基酸。GeneBank登錄號為:KJ803015;
　　（二）亞洲玉米螟OfDHFR基因表達模式研究:OfDHFR在亞洲玉米螟生長發(fā)育的各個時期均有表達，在玉米

4、螟卵的初期、三齡初期、五齡末期和剛羽化的雌性成蟲體內(nèi)的表達水平相對較高;OfDHFR在玉米螟的脂肪體和表皮中表達水平較高，在絲腺中表達水平相對較低;
　?。ㄈ┯衩酌菩猿上x的RNA干擾實驗表明:對5齡第2天的幼蟲進行RNA干擾，OfDHFR表達水平和表型未見差異;對羽化后的雌性成蟲進行RNA干擾，OfDHFR的表達水平下降48％，產(chǎn)卵數(shù)降低65％;
　　（四）DHFR抑制劑氨甲蝶呤(Methotreate，MTX)喂食實驗