還原葉酸載體(RFC)、二氫葉酸還原酶(DHFR)及谷胱甘肽巰基轉(zhuǎn)移酶(GST-π)與骨肉瘤MTX化療耐藥機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究RFC（還原葉酸載體）、GST-π（谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶π）、DHFR（二氫葉酸還原酶）mRNA在入骨肉瘤U2-OS細(xì)胞系及人骨肉瘤耐藥細(xì)胞系U2-OS/R1-R2中的表達(dá)差異，并探討其在人骨肉瘤MTX化療耐藥中的意義。 方法：采用沖擊并逐步增加誘導(dǎo)藥物濃度誘導(dǎo)的方法，誘導(dǎo)人骨肉瘤細(xì)胞系U2-OS，并建立耐MTX細(xì)胞系(U2-OS/R1-R3)； MTT法檢測(cè)各細(xì)胞株對(duì)氨甲喋呤(MTX)，順鉑(DDP)，阿霉素(ADM)及

2、異環(huán)磷酰胺(IFO)的藥物敏感性，計(jì)算半數(shù)抑制濃度(IC50)和耐藥指數(shù)(RI)；利用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞一般形態(tài)改變，繪制生長(zhǎng)曲線，檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)能力；利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各細(xì)胞株細(xì)胞周期分布；利用熒光定量PCR技術(shù)在mRNA水平檢測(cè)RFC、GST-π、DHFR在U2-OS及(U2-OS/R1-R3)中的表達(dá)。 結(jié)果：本試驗(yàn)成功建立三株入骨肉瘤耐藥細(xì)胞系U2-OS/R1-R3，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線示耐藥細(xì)胞株較原代細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間延長(zhǎng)；流式細(xì)胞

3、儀測(cè)細(xì)胞周期結(jié)果示耐藥細(xì)胞株阻滯在G1期，MTT法示耐藥細(xì)-胞株U2-OS/R1-R3對(duì)MTX耐藥指數(shù)分別為原代的49.19、60.13、63.3倍；熒光定量PCR結(jié)果顯示人骨肉瘤耐藥細(xì)胞系U2-OS/R1-R3中RFC mRNA的表達(dá)為原代U2-OS的0.7139、0.6258、0.4908倍(組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05)，RFC. mRNA的表達(dá)隨腫瘤耐藥性的增加而降低；U2-OS/R1-R3 DHFR mRNA的表達(dá)為原代

4、U2-OS的5.3145、12.8937、30.6501倍(組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05)，DHFR mRNA隨腫瘤耐藥性的增加而增加；U2-OS/R.-R。中GST-πmRNA的表達(dá)為原代U2-OS的1.9081、3.5420、4.8319倍（組間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.05)，GST-πmRNA的表達(dá)隨腫瘤耐藥性的增加而增加. 結(jié)論：MTX耐藥與DHFRmRNA表達(dá)增加有關(guān)，與RFCmRNA的表達(dá)降低有關(guān)，與GST-