熒光光度法二氫葉酸還原酶抑制劑篩選模型的建立和應(yīng)用.pdf

1、二氫葉酸還原酶(dihydrofolatereductase，DHFR，EC1.5.1.3)是核酸代謝中關(guān)鍵的酶之一，是癌癥藥物治療中的主要靶酶，近年來(lái)得到廣泛的研究。二氫葉酸還原酶抑制劑能選擇性的與二氫葉酸還原酶結(jié)合，抑制其催化還原活性，使二氫葉酸不能順利轉(zhuǎn)變?yōu)樗臍淙~酸，阻礙葉酸代謝，干擾DNA和蛋白質(zhì)的合成，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡，所以二氫葉酸還原酶抑制劑具有抗癌、抗菌和抗瘧的作用。近年來(lái)，有關(guān)二氫葉酸還原酶抑制劑的研究主要集中在新的抗癌

2、類藥物的合成及其定量構(gòu)效關(guān)系的研究。因此有必要建立一種快速、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單易行的方法對(duì)合成藥物進(jìn)行體外篩選。本文圍繞熒光光度法二氫葉酸還原酶抑制劑的篩選體系的建立與應(yīng)用，進(jìn)行了如下的工作： 第一章綜述了酶活力的測(cè)定方法，影響酶催化反應(yīng)的因素，熒光分析方法在酶分析中的應(yīng)用。 第二章通過(guò)對(duì)二氫葉酸還原酶催化反應(yīng)的反應(yīng)物二氫葉酸、NADPH和產(chǎn)物四氫葉酸、NADP熒光性質(zhì)的研究，用從Sigma公司購(gòu)置商品酶建立了用熒光光度法測(cè)定二

3、氫葉酸還原酶活力的體系，并應(yīng)用于抑制劑的篩選。用建立方法對(duì)一些已知的二氫葉酸還原酶抑制劑進(jìn)行檢測(cè)，所得結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道結(jié)果一致。 第三章為了節(jié)約試劑成本，克服購(gòu)置商品酶因活力較低而導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象不明顯，實(shí)驗(yàn)條件難以實(shí)現(xiàn)，重現(xiàn)性較差等缺點(diǎn)，進(jìn)一步優(yōu)化二氫葉酸還原酶抑制劑篩選模型，本文按照Kaufman等方法，對(duì)從雞肝中提取二氫葉酸還原酶進(jìn)行了研究，并對(duì)每一步提取步驟的蛋白濃度和酶活力進(jìn)行檢測(cè)，得到進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)所需要的酶產(chǎn)品，效果較為滿