柔嫩艾美爾球蟲與腸炎沙門氏菌混合感染的致病機制研究.pdf

1、多病原的混合感染已是一個普遍現(xiàn)象，研究表明，發(fā)病雞群中混合感染的發(fā)病率達到85％。關(guān)于共感染的研究已經(jīng)有很多報道，包括對寄生蟲、細菌和各種免疫抑制性病毒的共感染的案例、流行病學(xué)調(diào)查以及對共感染致病機理進行研究。有研究證實，球蟲感染可影響細菌感染，細菌感染也可影響球蟲致病性的強弱。艾美爾球蟲與沙門氏菌混合感染的病例臨床上較為常見，球蟲感染會嚴(yán)重損傷腸粘膜上皮，使得雞對沙門氏菌的易感性大大提高，并且由于正常條件下球蟲感染無處不在，可能會對沙

2、門氏菌感染水平傳播造成顯著影響。雖然雞群多種病原微生物共感染現(xiàn)象非常普遍，但大多數(shù)研究仍然集中在對單個病原的深入研究，或是有限的幾種病原共感染的研究，而對球蟲和沙門氏菌的共感染研究相對比較少。鑒于柔嫩艾美爾球蟲和腸炎沙門氏菌在雞群中普遍流行的現(xiàn)狀以及目前缺乏對這兩種病原共感染的研究，本文將柔嫩艾美爾球蟲和腸炎沙門氏菌共感染雛雞，檢測混合感染對宿主致病性的影響及宿主腸道菌群結(jié)構(gòu)的改變，并從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度分析二者混合感染的致病機制。試驗具

3、體分為以下幾個部分：
　　1.混合感染對宿主的致病性及相互作用:
　　12日齡時進行分組實驗，單獨感染和混合感染球蟲和沙門氏菌，從體重增長率、死亡率、免疫器官指數(shù)、T淋巴細胞亞群比例等方面評價混合感染對宿主致病性的影響。結(jié)果顯示混合感染組雛雞體重呈負增長，尤其是柔嫩艾美爾球蟲與腸炎沙門氏菌同時感染組體重下降最為顯著。所有感染組CD4/CD8比例均降低，混合感染組CD4/CD8比例最低，說明混合感染時機體自身免疫系統(tǒng)受到更嚴(yán)重

4、的損傷。此外，混合感染造成的死亡率也較球蟲和沙門氏菌單獨感染增加。以上結(jié)果說明柔嫩艾美爾球蟲與腸炎沙門氏菌混合感染較單獨感染對雛雞的致病性增強。對血便癥狀、病變計分及死亡率進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)混合感染和單獨感染均可造成盲腸嚴(yán)重病變，死亡率增加。對雛雞肝臟和脾臟沙門氏菌陽性率及盲腸內(nèi)容物內(nèi)沙門氏菌數(shù)量進行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)球蟲感染可增加沙門氏菌感染的肝、脾陽性率，使腸炎沙門氏菌在體內(nèi)定殖時間延長。以上結(jié)果說明腸炎沙門氏菌與柔嫩艾美爾球蟲混合感染

5、具有協(xié)同致病作用。
　　2.混合感染對腸道菌群的影響:
　　我們收集了感染第五天雛雞的盲腸內(nèi)容物，通過16S rRNA Miseq高通量測序檢測雞盲腸菌群組成。結(jié)果表明，18日齡萊航雞盲腸內(nèi)主要菌群為厚壁菌門和擬桿菌門。柔嫩艾美爾球蟲感染后乳酸桿菌科和丹毒絲菌科比例減少，而沙門氏菌感染后瘤胃菌科、毛螺菌科和乳酸桿菌科增加，擬桿菌科減少。與柔嫩艾美爾球蟲或腸炎沙門氏菌單獨感染相比，混合感染導(dǎo)致腸桿菌科等條件致病菌明顯增加，乳桿

6、菌科等有益菌減少。以上實驗結(jié)果表明柔嫩艾美爾球蟲與腸炎沙門氏菌混合感染打破腸道菌群平衡，使其向著有利于二者定殖的方向發(fā)展。
　　3.混合感染對宿主盲腸扁桃體蛋白質(zhì)表達的影響:
　　感染第5天收集各組實驗雞的盲腸扁桃體，提取、純化蛋白質(zhì)，進行雙向電泳及質(zhì)譜技術(shù)分析。經(jīng)PD Quest軟件分析后共篩選出58個差異蛋白點，選取兩者差異表達2倍以上的點34個，將這34個蛋白差異點送往上海中科新生命生物科技有限公司進行質(zhì)譜鑒定，其中，