牦牛周期黃體退化過程中黃體細胞凋亡的生物學特征.pdf

1、本研究采用不同的手段和研究方法,通過對牦牛周期黃體退化過程中組織形態(tài)學的觀察、體外培養(yǎng)條件下周期黃體細胞凋亡的生物學特征的分析、TNFa對體外培養(yǎng)周期黃體細胞凋亡的影響以及周期黃體退化過程中黃體細胞內(nèi)c-myc和Bad的表達的測定等,系統(tǒng)地研究了牦牛周期黃體退化過過程中細胞凋亡的生物學特征,取得了如下結(jié)果:(1)采集不同階段牦牛的周期黃體,進行HE染色、光鏡觀察、超微結(jié)構(gòu)觀察和DNA原位熒光標記檢測(DAPI),發(fā)現(xiàn)整個周期黃體期均有黃

2、體細胞凋亡現(xiàn)象,但主要見于發(fā)情期黃體.隨著黃體老化,黃體組織中的血管也發(fā)生退化.(2)用酶消化法制備牦牛原代黃體細胞,經(jīng)血清撤除誘導其凋亡,然后檢測其生物學特征.采用原位熒光標記(DAPI和PI法)法檢測發(fā)現(xiàn),凋亡細胞主要表現(xiàn)為核固縮、并發(fā)散高亮的藍色熒光;DNA原位末端標記檢測表明,凋亡細胞呈TUNEL陽性反應;透射電鏡觀察顯示,凋亡細胞核固縮、染色質(zhì)邊集、核碎裂和凋亡小體形成;DNA電泳呈現(xiàn)典型的"梯狀帶",與已知分子量的Mark對

3、比,證實凋亡的黃體細胞中存在分子量為180-200bp整倍數(shù)的DNA片段.(3)在培養(yǎng)液中,添加不同劑量的TNFa,均能誘導體外培養(yǎng)的牦牛周期黃體細胞發(fā)生凋亡,并呈劑量依賴性;流式細胞術(shù)(FCM)檢測,可見明顯的凋亡峰.(4)用免疫組化法檢測了周期黃體不同階段c-myc和Bad的表達情況,發(fā)現(xiàn)在整個周期黃體期,黃體細胞中c-myc和Bad均有不同程度的表達,并且均定位于細胞漿中.在周期黃體存活的過程中,隨著其存活時間的延長,黃體細胞的陽