近交系五指山小型豬解剖和組織學(xué)研究及內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒（PERV）的檢測(cè).pdf

1、五指山豬是我國(guó)特有的地方豬種之一，原產(chǎn)于偏僻邊遠(yuǎn)的海南省五指山地區(qū)，上世紀(jì)80年代引種到北京畜牧獸醫(yī)研究所，經(jīng)20多年近交繁育，目前，已培育成近交系數(shù)高達(dá)0.979的小型豬群體，成年體重僅為30kg-35kg。近交系五指山小型豬以其體型矮小、遺傳穩(wěn)定、近交程度高等諸多優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)的各研究領(lǐng)域，成為人類疾病研究理想的動(dòng)物模型，并列為我國(guó)異種器官移植的首選豬種。然而，近些年來(lái)，PERV可以在體外感染人細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn)對(duì)豬用于人類異

2、種器官移植的安全性提出了質(zhì)疑，篩選無(wú)PERV的豬用于異種移植變得非常重要。為此，本研究以近交16代的五指山小型豬為研究對(duì)象，對(duì)其消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)和心臟的解剖結(jié)構(gòu)，心臟、肝臟、腎臟、免疫系統(tǒng)和部分生長(zhǎng)軸器官的顯微和超微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察研究，并對(duì)其15種組織的PERV-RNA的表達(dá)情況進(jìn)行了檢測(cè)，主要研究結(jié)果如下： 1.近交系五指山小型豬消化、泌尿器官及心臟的解剖學(xué)研究本試驗(yàn)通過(guò)大體解剖學(xué)方法對(duì)近交系五指山小型豬消化、泌尿器官及心臟

3、的解剖特點(diǎn)進(jìn)行觀察，結(jié)果顯示：近交系五指山小型豬前臼齒發(fā)育一般較晚，胃外觀呈“V”形，小腸和大腸較其它豬種短，肝臟呈圓角梯形。腎前端較后端鈍圓，后端距正中線較遠(yuǎn)，部分五指山小型豬有兩條腎動(dòng)脈入腎，膀胱沒(méi)有明顯的膀胱三角。從2-12月齡，心臟橫徑變化較大，右心耳與腔靜脈竇之間界嵴不發(fā)達(dá)，冠狀竇口處沒(méi)有瓣膜，奇靜脈直接開(kāi)口于此。與人類的相比，舌上葉狀乳頭發(fā)達(dá)，輪廓乳頭較少，胃賁門和幽門相距較近，空腸和回腸較長(zhǎng)，盲腸粗大，結(jié)腸形成結(jié)腸圓錐；腎

4、臟、膀胱大體形態(tài)和位置與人類的相比基本相似，而肝臟和胰腺的形態(tài)與人類的相比差異較大。12月齡心臟的重量、體積等解剖常數(shù)較成人類的小，左右肺靜脈直徑較小，前后腔靜脈管徑一致。這些結(jié)構(gòu)特點(diǎn)表明，近交系五指山小型豬消化系統(tǒng)與人類的相比差異較大，其用于異種器官移植存在解剖學(xué)上的困難。而心臟和腎臟與人類的相比較為接近，適用于異種器官移植。 2.近交系五指山小型豬免疫器官的組織學(xué)觀察為給近交系五指山小型豬用于建立人類免疫相關(guān)疾病模型提供基礎(chǔ)

5、形態(tài)學(xué)方面的資料，本試驗(yàn)采用石蠟切片和HE染色對(duì)其免疫器官的組織特點(diǎn)進(jìn)行觀察研究。結(jié)果顯示：從出生到性成熟，胸腺實(shí)質(zhì)內(nèi)處于分裂期胸腺細(xì)胞和成熟胸腺細(xì)胞的數(shù)量均增多，胸腺小體的數(shù)量也增多。成年時(shí)，胸腺細(xì)胞數(shù)量減少，排列疏松，胸腺小體和胸腺上皮細(xì)胞均減少。2月齡時(shí)胸腺小體周圍可見(jiàn)許多大小不同的空泡狀細(xì)胞和變形細(xì)胞碎片。脾白髓動(dòng)脈周圍淋巴鞘和脾小結(jié)在4月齡前也隨年齡增長(zhǎng)而逐漸增多增大，但12月齡時(shí)有所減少并維持在一定水平，其變化與大鼠和雞的基

6、本一致。2月齡時(shí)，淋巴結(jié)皮質(zhì)在內(nèi)，髓質(zhì)在外，4月齡時(shí)兩者分界不明顯。與2和4月齡相比，12月齡淋巴小結(jié)較大，淋巴細(xì)胞排列疏松，髓質(zhì)內(nèi)淋巴細(xì)胞較少，毛細(xì)血管增多。從整體上觀察，免疫器官的組織學(xué)結(jié)構(gòu)與人和其它哺乳動(dòng)物之間沒(méi)有明顯的差異。 3.近交系五指山小型豬心、肝、腎顯微和超微結(jié)構(gòu)研究心、肝和腎移植在同種和異種器官移植中都具有重要的地位和作用，研究這3種器官的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)對(duì)其應(yīng)用于移植具有重要的意義。本試驗(yàn)通過(guò)顯微和超微組織學(xué)技術(shù)對(duì)近

7、交系五指山小型豬心、肝和腎的形態(tài)特征進(jìn)行研究，結(jié)果表明，2月齡小型豬這些器官結(jié)構(gòu)還沒(méi)有發(fā)育完全，4月齡小型豬各結(jié)構(gòu)非常明顯，正處于旺盛的發(fā)育期。但從整體角度觀察，12月齡時(shí)，心室壁、肝臟和腎臟的組織學(xué)結(jié)構(gòu)以及心室肌、肝臟和腎皮質(zhì)的超微結(jié)構(gòu)與人類的最為相近，適合作為異種移植的器官供體。 4.近交系五指山小型豬垂體、甲狀腺和胰腺的形態(tài)學(xué)研究近交系五指山小型豬腦垂體位于成形的垂體窩內(nèi)，腺垂體包繞神經(jīng)垂體，中間部較狹窄，其內(nèi)濾泡樣結(jié)構(gòu)不

8、明顯，腺垂體促性腺激素細(xì)胞分泌顆粒最大，促腎上促腎上腺皮質(zhì)激素細(xì)胞分泌顆粒最小，神經(jīng)垂體軸突內(nèi)分泌顆粒較少，赫令體不明顯。甲狀腺腺泡隨年齡的增長(zhǎng)逐漸增大，腺泡上皮細(xì)胞微絨毛不發(fā)達(dá)，腺泡旁細(xì)胞有高電子密度和低電子密度兩種。胰腺腺泡排列緊密，腺泡間結(jié)締組織不發(fā)達(dá)，胰島周圍沒(méi)有結(jié)締組織包繞，相鄰腺泡細(xì)胞側(cè)面有連接復(fù)合體，胞質(zhì)內(nèi)充滿大而圓的酶原顆粒，泡心細(xì)胞較大，部分呈立方形，腺泡間毛細(xì)血管可見(jiàn)立方形的胞核。以上結(jié)果表明，近交系五指山小型豬腦垂