TLR2對(duì)五指山小型豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥因子表達(dá)的影響.pdf

1、動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)被認(rèn)為是一種慢性炎癥性疾病.Toll樣受體2(Toll-like receptor2，TLR2)是介導(dǎo)天然免疫反應(yīng)中的一種模式識(shí)別受體,研究表明TLR2在AS的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用.已證實(shí)TLR2在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊處血管內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá),且在血流動(dòng)力學(xué)紊亂的部位高表達(dá).AS發(fā)展中內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生功能障礙,能產(chǎn)生多種細(xì)胞因子,促進(jìn)AS.本實(shí)驗(yàn)旨在探討TLR2在內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生炎癥反應(yīng)中的作用

2、,通過(guò)LPS和TNF-α刺激內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)TLR2高表達(dá),并通過(guò)RNA干擾(RNA interference，RNAi)技術(shù)沉默TLR2,觀察TLR2對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)炎癥因子的影響.
　　方法：采用0.1％膠原酶消化法分離3～4月齡雄性五指山小型豬的主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞,并進(jìn)行體外傳代培養(yǎng),使用LPS、TNF-α和LTA分別刺激該細(xì)胞0、6、8、12和24 h，real-time PCR檢測(cè)TLR2和TLR4 mRNA表達(dá)水平;LPS和TN

3、F-α預(yù)刺激內(nèi)皮細(xì)胞24 h后,添加LTA孵育0、6和12 h,real-time PCR檢測(cè)炎癥因子IL-6、IL-8、MCP-1和黏附分子ICAM-1的mRNA表達(dá)量及ELISA檢測(cè)IL-6的分泌量.通過(guò)向內(nèi)皮細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siRNA降低TLR2的表達(dá),添加LTA孵育12 h,檢測(cè)內(nèi)皮細(xì)胞IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1的mRNA表達(dá)量.
　　結(jié)果：分離得到的五指山小型豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)呈鋪路石樣,生長(zhǎng)狀態(tài)良好.經(jīng)細(xì)

4、胞表面抗原鑒定證實(shí)此細(xì)胞為血管內(nèi)皮細(xì)胞.內(nèi)皮細(xì)胞未受刺激時(shí),TLR2的表達(dá)量很低;LPS和TNF-α刺激細(xì)胞6和8 h后,TLR2表達(dá)量有所升高,12和24 h后,TLR2的表達(dá)量明顯升高(P＜0.05),而LTA刺激內(nèi)皮細(xì)胞后,TLR2的表達(dá)量未升高.未受刺激時(shí),可檢測(cè)到內(nèi)皮細(xì)胞中TLR4的表達(dá),而LPS和TNF-α刺激細(xì)胞后,TLR4的表達(dá)無(wú)明顯變化.LPS和TNF-α預(yù)刺激細(xì)胞24 h后,TLR2表達(dá)升高并介導(dǎo)LTA刺激內(nèi)皮細(xì)胞表

5、達(dá)IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1的mRNA水平明顯升高,且細(xì)胞分泌IL-6的量升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05).通過(guò)RNAi技術(shù)沉默TLR2后,LTA刺激內(nèi)皮細(xì)胞使IL-6、IL-8、MCP-1和ICAM-1mRNA表達(dá)量降低.
　　結(jié)論:
　　1、LPS和TNF-α誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞TLR2的表達(dá)量升高.說(shuō)明當(dāng)LPS,革蘭氏陰性細(xì)菌的成分感染內(nèi)皮細(xì)胞,能引起TLR2表達(dá)升高;當(dāng)單核∕巨噬細(xì)胞分泌的炎癥因子TN