B7-H4在肺癌和結(jié)直腸癌組織中的表達及不同腫瘤患者可溶性B7-H4的檢測.pdf

1、[目的]
　　 B7-H4(B7S1、B7x)是最近發(fā)現(xiàn)的B7家族成員，能通過抑制T細(xì)胞的增殖、細(xì)胞因子的產(chǎn)生和細(xì)胞周期的進程來負(fù)性調(diào)控T細(xì)胞的免疫應(yīng)答，其在多種腫瘤組織中的高表達，提示其在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中的作用，并被認(rèn)為是某些腫瘤的新型腫瘤標(biāo)志物。
　　 本文采用免疫組織化學(xué)法檢測部分肺癌及結(jié)直腸癌組織B7-H4的表達，采用重組小鼠B7-H4(mB7-H4)蛋白作為抗原制備兔抗小鼠B7-H4多克隆抗體，并建立檢測人可溶

2、性B7-H4(soluble B7-H4，sB7-H4)的ELISA夾心法，并對部分腫瘤患者血清sB7-H4水平進行檢測，以探討sB7-H4的檢測對腫瘤的診斷及預(yù)后的意義，并為研究B7-H4在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用奠定基礎(chǔ)。
　　 [方法]
　　 1.肺癌和結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中B7-H4的表達
　　 采用抗人B7-H4單克隆抗體作為一抗，借助免疫組織化學(xué)法檢測20例肺癌和20例結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中B7-H4的

3、表達。
　　 2.兔抗小鼠B7-H4多克隆抗體的制備及鑒定
　　 用純化的重組小鼠B7-H4蛋白作為抗原，免疫家兔，制備兔抗小鼠B7-H4多克隆抗體，并對其特異性及純度進行鑒定。
　　 3.sB7-H4 ELISA檢測方法的建立
　　 以抗人B7-H4單克隆抗體做為包被抗體，純化的重組小鼠B7-H4作為參考標(biāo)準(zhǔn)品，兔抗小鼠B7-H4多克隆抗體作為捕獲抗體，HRP標(biāo)記羊抗兔IgG作為二抗，建立檢測可溶性B7

4、-H4的ELISA夾心法。
　　 4.腫瘤患者血清sB7-H4的檢測
　　 用建立的檢測sB7-H4的ELISA法對630例不同種腫瘤患者血清sB7-H4水平進行檢測，并以正常體檢者血清sB7-H4水平作為對照，分析腫瘤患者與正常體檢者血清sB7-H4濃度的差異。
　　 [結(jié)果]
　　 1.肺癌和結(jié)直腸癌患者腫瘤組織中B7-H4的表達
　　 通過免疫組織化學(xué)法檢測20例肺癌和20例結(jié)直腸癌腫瘤組織

5、B7-H4的表達，結(jié)果顯示B7-H4在肺癌和結(jié)直腸癌腫瘤組織中高表達，提示B7-H4可能在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。
　　 2.兔抗小鼠B7-H4多克隆抗體的制備及鑒定
　　 成功制備了兔抗小鼠B7-H4多克隆抗體，經(jīng)過半飽和硫酸銨初步純化后，其ELISA效價為1:12800，多克隆抗體除與重組小鼠B7-H4蛋白結(jié)合外，還能結(jié)合人腫瘤組織中的B7-H4，其純度及特異性均達到后續(xù)試驗要求。
　　 3.可溶性B7

6、-H4 ELISA檢測方法的建立
　　 成功建立了sB7-H4 ELISA檢測方法，檢測范圍在3.13μg/L～200μg/L之間，批內(nèi)重復(fù)性試驗和批間重復(fù)性試驗的變異系數(shù)分別為7.92％和11.1％，平均回收率達到了90.1％，說明該方法的準(zhǔn)確度和精密度都較好。
　　 4.腫瘤患者血清B7-H4的檢測
　　 用以上建立的方法對630例不同種腫瘤患者血清sB7-H4水平進行了檢測，結(jié)果顯示肝癌、胃癌、結(jié)直腸癌、食

7、管癌、肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、惡性淋巴瘤患者血清sB7-H4含量均高于正常對照，而子宮肌瘤、白血病、多發(fā)性骨髓瘤患者血清sB7-H4與正常對照無差異。
　　 [結(jié)論]
　　 證實了B7-H4在肺癌及腸癌組織中高表達，其表達程度與腫瘤的病例分型和患者的臨床分期相關(guān)；成功制備了兔抗小鼠B7-H4多克隆抗體，建立了檢測sB7-H4的ELISA夾心法；初步證實了sB7-H4在多種腫瘤患者血清中含量增高。提示B7-H