5-氮雜-2′-脫氧胞苷對人紅白血病K562細(xì)胞系生物學(xué)活性及DNA結(jié)合抑制因子4基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：研究5-氮雜-2′-脫氧胞苷（5-Aza-CdR）對人慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）急紅變細(xì)胞系K562細(xì)胞生物學(xué)活性和DNA結(jié)合抑制因子4（ID4）基因表達(dá)的影響，探尋白血病基因治療的新靶點。
　　 方法：1.應(yīng)用甲基化特異性PCR（MS-PCR）方法檢測CML 急紅變細(xì)胞系K562細(xì)胞中ID4基因甲基化情況。2.實時熒光定量PCR（RQ-PCR）檢測不同濃度5-Aza-CdR（0.5，2，5，10μM）處理K562細(xì)胞48

2、h后ID4 mRNA的表達(dá)水平。3.FITC 標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白V/碘化丙錠（Annexin V-FITC/PI）雙染色流式細(xì)胞術(shù)分析不同濃度5-Aza-CdR 作用24h，48h，72h后細(xì)胞凋亡率的變化，并分析5-Aza-CdR 作用48h后細(xì)胞周期的變化。
　　 結(jié)果：K562細(xì)胞中存在ID4基因的甲基化；5-Aza-CdR 處理后K562細(xì)胞ID4 mRNA表達(dá)增加，并具有濃度依賴性。ID4基因的表達(dá)水平在不同藥物處理組之間

3、差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。5-Aza-CdR 可使K562細(xì)胞凋亡率增加，并且作用呈時間劑量依賴性。5μM 5-Aza-CdR 處理K562細(xì)胞24h，48h，72h后細(xì)胞凋亡率分別為15.3％，17.6％，21.3％。不同濃度5-Aza-CdR(0.5，2，5，10μM)處理K562細(xì)胞48h后細(xì)胞凋亡率分別為6.9％，12.6％，17.6％，29.3％。與對照組相比，統(tǒng)計學(xué)差異具有顯著性（P＜0.05）。5-Aza-CdR

4、 處理K562細(xì)胞48h后，隨著藥物濃度的增加，G0/G1 期細(xì)胞逐漸增多，G2/M 期細(xì)胞逐漸減少，細(xì)胞阻滯在G0/G1 期。0μM、2μM和5μM 5-Aza-CdR處理48h后G0/G1 期細(xì)胞分別為26.45％，33.49％，40.68％；G2/M 期細(xì)胞分別為17.54％，8.44％，6.48％。處理組與對照組相比，均有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.01）。
　　 結(jié)論：甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-Aza-CdR 能促使CML 急