溶石顆粒劑防治腎結(jié)石的藥理作用及其機制研究.pdf

1、溶石顆粒劑組方以祖國醫(yī)學理論為依據(jù)，根據(jù)民間治療泌尿系結(jié)石驗方，由連錢草、海金沙、延胡索、三七、莪術(shù)、地龍、雞內(nèi)金等藥味組成。該組方為浙江省立同德醫(yī)院中醫(yī)科的經(jīng)驗方，具有確切的防治腎結(jié)石臨床療效。由于腎結(jié)石發(fā)病原因復雜，腎結(jié)石形成的確切機制至今尚未闡明，目前臨床治療結(jié)石病除手術(shù)與體外碎石法外，尚缺乏有確切療效的特異藥物，而手術(shù)與體外碎石法對腎臟本身存在較大損傷，隨之而來的復發(fā)問題又是治療中的一大難題。鑒于中醫(yī)藥治療腎結(jié)石有悠久的歷史和良

2、好的臨床效果，因此探索中醫(yī)藥防治結(jié)石病就具有十分重要的現(xiàn)實意義。本研究評價了中醫(yī)驗方溶石顆粒劑的藥效，并通過測定用藥前后腎臟骨橋蛋白(Osteopontin，OPN)含量的變化，及對尿晶體成分影響來闡明溶石顆粒劑治療腎結(jié)石的作用機理，旨在以現(xiàn)代藥理學的方法評價溶石顆粒劑藥效，并從分子水平進一步闡明其作用機制，為溶石顆粒劑的推廣應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 本研究選用乙二酰胺(草酰胺)法和乙二醇、氯化胺法致大鼠泌尿系結(jié)石模型，進行了如下實驗

3、： 1、溶石顆粒劑的最大給藥劑量測定本研究不能測出溶石顆粒劑LD50。為了進一步評價其安全性，為臨床提供參考，測定了小鼠一日的最大給藥劑量為3.84g，溶石顆粒劑成人臨床用量為60g/d，小鼠ig給予溶石顆粒劑，一日最大給藥劑量為成人臨床用量的192倍。 2、溶石顆粒劑對乙二酰胺喂飼法致大鼠泌尿系結(jié)石形成的影響采用乙二酰胺喂飼法致大鼠泌尿系結(jié)石模型，以結(jié)石動物數(shù)、結(jié)石率、腎組織中草酸和鈣含量及結(jié)晶面積百分比為指標，研究溶

4、石顆粒劑對乙二酰胺喂飼法致大鼠泌尿系結(jié)石的影響。結(jié)果顯示一天一次ig給予溶石顆粒劑5.8g/kg、11.6g/kg、17.4g/kg(其中低劑量接近成人臨床用量)，均能明顯降低濕腎組織中草酸和鈣含量及結(jié)晶面積比(P＜0.05)，且呈明顯的量效關(guān)系。提示溶石顆粒劑能減輕草酸鈣結(jié)晶對腎小管上皮損傷的程度，從而減少OPN粘附于受損的上皮細胞表面的機會，減少晶體成核的位點。高劑量尚能明顯減少腎臟、輸尿管、膀胱總結(jié)石動物數(shù)(P＜0.05)。

5、 3.溶石顆粒劑體外溶石作用試驗溶石顆粒劑對市售草酸鈣結(jié)晶溶解作用的體外試驗表明：5﹪、10﹪溶石顆粒劑對草酸鈣結(jié)晶具有一定溶解作用，浸泡10天的溶石率分別為10.42﹪、18.64﹪。與加藥前比較，差異具有顯著意義(P＜0.05)。 4.溶石顆粒劑對結(jié)石模型大鼠腎OPN表達的影響采用乙二醇、氯化胺法致大鼠腎結(jié)石，同時一天一次ig給予溶石顆粒劑5.8g/kg、11.6g/kg、17.4g/kg，實驗全程21d。每7d作以下測定

6、：血標本測定尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、鈣和磷含量；尿標本以EDTA法測定鈣含量，比色法測定草酸含量；腎組織HE染色，以免疫組化法和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)評價溶石顆粒劑對結(jié)石模型大鼠腎OPN及其mRNA表達的影響。 結(jié)果顯示：1)模型組大鼠腎OPN及其mRNA的表達明顯增加，與溶劑對照組相比(P＜0.01)，其中21d模型組OPN及其mRNA的表達最高，OPN的表達為溶劑對照組的1.4倍(0.2813/0.20

7、18)，而OPNmRNA的表達為溶劑對照組的4倍(1.3975/0.3410)；2)溶石顆粒劑各劑量組均能明顯抑制大鼠腎結(jié)石模型OPN及其mRNA的表達(P＜0.05)，且呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系；3)溶石顆粒劑各劑量組能減輕大鼠腎臟草酸鈣結(jié)晶程度，顯著降低大鼠尿鈣和草酸含量(P＜0.01)。 5、溶石顆粒劑的抗炎、鎮(zhèn)痛、利尿作用的實驗研究采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹，評價溶石顆粒劑的抗炎作用。結(jié)果顯示一天一次ig給予溶石顆粒劑12.40

8、g/kg、24.80g/kg、37.20g/kg時(其中低劑量接近臨床人用量)，均能明顯降低二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度(P＜0.05)，提示溶石顆粒劑具有明顯的抗炎作用。 通過腹腔注射醋酸引起小鼠扭體反應(yīng)，以小鼠用藥后扭體數(shù)減少為指標，評價溶石顆粒劑的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果提示溶石顆粒劑各劑量組能顯著抑制醋酸引起小鼠扭體反應(yīng)(P＜0.05)，具有明顯的鎮(zhèn)痛作用。 利用代謝籠法觀察溶石顆粒劑對大鼠排尿量的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)溶石顆粒劑在1

9、1.6g/kg、17.4g/kg劑量時，6h內(nèi)能明顯增加大鼠排尿量(P＜0.05)。 以上結(jié)果表明：1、溶石顆粒劑能明顯抑制乙二酰胺法誘導的大鼠泌尿系總結(jié)石發(fā)生率，減少結(jié)石動物數(shù)，明顯降低濕腎組織中草酸和鈣含量及結(jié)晶面積比，減輕草酸鈣結(jié)晶對腎小管上皮損傷的程度，從而減少OPN粘附于受損上皮細胞表面的機會，減少晶體成核的位點。 2、溶石顆粒劑能明顯降低二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度，明顯抑制醋酸致小鼠的扭體反應(yīng)，6h內(nèi)能明顯增加

10、大鼠排尿量，提示具有一定的抗炎、鎮(zhèn)痛、利尿作用，可以促進結(jié)石的下移和排出，對結(jié)石可能導致的炎癥、疼痛具有較好的抗炎、鎮(zhèn)痛的療效。 3、5﹪、10﹪溶石顆粒劑體外對草酸鈣結(jié)晶具有不同程度的溶解作用。溶石顆粒劑ig給藥組大鼠尿鈣和草酸含量明顯低于模型組，提示溶石顆粒劑可以抑制結(jié)石形成。 4、溶石顆粒劑可以抑制大鼠腎結(jié)石模型中OPN及mRNA的表達，推測溶石顆粒劑防治腎結(jié)石形成的機制與抑制大鼠腎結(jié)石模型非磷酸化OPN的表達，減