羊躑躅根有效部位及其藥理作用研究.pdf

1、羊躑躅根為杜鵑花科(EricAceAe)杜鵑花屬(Rhododendron)植物羊躑躅(Rhododendron Molle G.Don)的干燥根。羊躑躅根具有抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫抑制等作用,曾做為醫(yī)院制劑治療類風濕性關(guān)節(jié)炎,療效顯著,且毒副作用小,具有較好的研究價值。
　　本課題包括兩個方面的內(nèi)容:
　　一.藥學研究,對醇浸膏用大孔樹脂富集得到有效部位,并測定其總黃酮含量;對羊躑躅根有效部位進行分離純化,鑒定其化學成分。旨在研

2、究羊躑躅根治療類風濕性關(guān)節(jié)炎有效部位的組成和物質(zhì)基礎(chǔ),以提供質(zhì)量可控的原料藥做藥效學研究,并為今后的臨床研究與制劑做準備。
　　通過大孔樹脂吸附法,將醇浸膏拌樣吸附于樹脂上,依次用50％乙醇和95％乙醇做洗脫溶劑,得到50％部分和95％部分。用經(jīng)典的NANO2-Al(NO3)3-NAOH顯色法,以蘆丁為對照品,測定浸膏及過大孔樹脂后兩部分的總黃酮含量。多批實驗測定結(jié)果顯示,經(jīng)大孔樹脂后的50％部分平均含量為75.81％,95％部分

3、為26.86％。將50％和95％部分按比例合并,得到含量在60％以上的有效部位。
　　大孔樹脂50％和95％乙醇洗脫部分分別經(jīng)過硅膠柱、聚酰胺柱、SephAdex LH-20凝膠柱、ODS反相柱等柱層析方法分離純化,得到5個單體化合物。應(yīng)用UV,HPLC,1H-NMR,13C-NMR等波譜學分析方法,鑒定其結(jié)構(gòu)。五個化合物分別為:熊果酸ursolic Acid(Ⅰ),原兒茶酸protocAtechuic Acid(Ⅱ),兒茶素(+

4、) cAtechin(Ⅲ),表兒茶素(-) epicAtechin(Ⅳ)和蘆丁rutin(Ⅴ)。其中,原兒茶酸(Ⅱ)、表兒茶素(Ⅳ)和蘆丁(Ⅴ)為首次從羊躑躅植物分離得到。熊果酸(Ⅰ)和兒茶素(Ⅲ)為首次從羊躑躅根中分離。
　　二.藥效學研究:
　　羊躑躅根有效部位的急性毒性研究,以了解其安全性,為動物實驗給藥劑量提供依據(jù)。急性毒性實驗表明,羊躑躅根有效部位的LD50=3.491g/kg。
　　對羊躑躅根有效部位在實驗

5、性關(guān)節(jié)炎的作用進行研究,以了解其對類風濕性關(guān)節(jié)炎的作用及作用機理。
　　本實驗以佐劑性關(guān)節(jié)炎(AA)大鼠為實驗?zāi)Ｐ?模型組給予0.5％CMC-NA溶液;陽性對照組給予雷公藤多苷;羊躑躅根治療組給予不同劑量的羊躑躅根有效部位。觀察大鼠足爪腫脹情況和踝關(guān)節(jié)病理組織變化。用MTT法檢測各組大鼠的脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化率(LTT),ELISA法檢測血清和脾細胞培養(yǎng)液中腫瘤壞死因子(TNF-α),血清中白細胞介素-6(IL-6)和白細胞介素-10(