積雪草抗老年性癡呆有效部位的篩選及藥理作用的研究.pdf

1、目的：對積雪草不同提取部位進行體外抗老年性癡呆（AD）篩選，確定有效部位，并研究其抗AD相關(guān)藥理作用。從實驗動物記憶行為學(xué)指標來探究有效部位對快速老化模型小鼠SAMP8記憶行為的改善作用；探究其對SAMP8小鼠體內(nèi)自由基代謝和APP、BACE-1基因表達的影響，為研究和開發(fā)積雪草成為新的抗AD藥物提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：1.積雪草有效部位體外篩選：采用MTT法體外測定積雪草不同提取部位對小鼠腎上腺嗜鉻瘤細胞株細胞PC12增殖的影

2、響。2.體外抗AD的作用研究：采用MIT法檢測積雪草乙酸乙酯部位對Aβ25-35片段造成PC12細胞的損傷模型的增殖作用，Hoechst33258染色后，用熒光顯微鏡觀察積雪草乙酸乙酯部位作用細胞損傷模型的形態(tài)學(xué)變化。3．急性毒性實驗（MTD測定）：給實驗小鼠灌服最大濃度和最大容量的積雪草乙酸乙酯部位，測定小鼠灌胃的最大耐受量。4.體內(nèi)抗老年性癡呆（AD）作用研究：采用Morris水迷宮方法以尋求次數(shù)、逃避潛伏期、平臺象限比等為指標對小

3、鼠記憶行為進行檢測，觀察中藥積雪草乙酸乙酯部位對小鼠行為學(xué)的影響。用Elisa法測定藥物對小鼠腦組織中SOD、GSH-PX的影響；采用半定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT- PCR)測定SAMP8鼠腦內(nèi)APP，BACE-1mRNA含量。
　　結(jié)果：1.通過MTT法，篩選出積雪草有效部位為乙酸乙酯部位。2.體外抗AD的作用研究顯示：①在PC12細胞致AD模型的預(yù)防作用實驗中，乙酸乙酯部位對細胞有保護作用，通過熒光顯微鏡觀察到用藥組的凋亡細

4、胞少于對照組與M T T的結(jié)果相符；②在PC12細胞致AD模型的治療作用實驗中，乙酸乙酯部位對細胞有保護作用，通過熒光顯微鏡觀察到用藥組的凋亡細胞少于對照組與MTT的結(jié)果相符。3.急性毒性實驗結(jié)果表明，小鼠灌胃給藥的最大給藥量為每日32g生藥，相當于成人日用量的3200倍。4.體內(nèi)抗AD作用研究顯示：Morris水迷宮學(xué)習(xí)能力測試：⑴游泳能力測定結(jié)果顯示，各組間比較無明顯差別（P>0.05）。⑵定位航行實驗：①模型對照組逃避潛伏期與其他

5、各相比明顯延長；中劑量組逃避潛伏期與模型對照組比較明顯低于模型對照組（P<0.01）。②模型對照組尋求次數(shù)均低于其他各組；中劑量組與模型對照組的比較明顯高于模型對照組（P<0.01）。③模型對照組平均停留時間明顯比其他給藥組短；中劑量組與模型對照組比較明顯長于模型對照組（P<0.01）。④模型對照組平臺象限比明顯低于中劑量組（P<0.01）。⑶腦組織相關(guān)酶學(xué)指標測定：①SOD測定：除低劑量組外其他各組與模型對照組比較均有顯著性差異（P<

6、0.05）。②GSH-PX測定：中劑量組及Hup-A組與模型對照組比較有顯著性差異（P<0.05），其他兩組與模型對照組相比都無差異。⑷腦組織相關(guān)癡呆基因指標測定：①BACE-1測定：Hup-A組及中劑量組與模型對照組比較有非常顯著性差異（P<0.01），高劑量與模型對照組比有顯著性差異（P<0.05），低劑量組與模型對照組比較無顯著差異。②APP測定：除高劑量組和低劑量組外，其他兩組與模型對照組相比有顯著性差異（P<0.05）。