連錢草抗泌尿系草酸鈣結(jié)石的藥理作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：泌尿系統(tǒng)中結(jié)石的形成主要包括了結(jié)石結(jié)晶的成核、生長(zhǎng)、聚集及滯留。其全球發(fā)病率為1％-20％，平均約為10％。伴隨微創(chuàng)外科新技術(shù)的不斷進(jìn)步，結(jié)石患者絕大多數(shù)得到了滿意的療效，但結(jié)石的高復(fù)發(fā)率，抗結(jié)石藥物的不良反應(yīng)，仍是一個(gè)困擾人類的大難題。雖然研究表明，噻嗪類利尿劑與檸檬酸鹽等能在一定程度上預(yù)防泌尿系統(tǒng)結(jié)石的形成與生長(zhǎng)，但發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)期使用該類藥物會(huì)有較為明顯的副作用及不良反應(yīng)。因此，人們目前試圖解決的一大難題便是重新開發(fā)研究一些較為安全

2、有效、價(jià)格低廉、能夠長(zhǎng)期服用并且并發(fā)癥相對(duì)較少的抗結(jié)石藥物。近幾年，以銀杏葉、紫杉醇、青蒿素與喜樹堿等一批植物為研究基礎(chǔ)研發(fā)了一些新的藥物，其抗結(jié)石作用得到了肯定，更多植物制劑的研究為人們的研究提供了新的思路。祖國(guó)醫(yī)學(xué)中，連錢草常用來(lái)治療腎結(jié)石，但其作用并不肯定。我們擬將中藥多作用靶點(diǎn)的特點(diǎn)運(yùn)用起來(lái)，通過(guò)蛋白組學(xué)的方法，探討其預(yù)防泌尿系結(jié)石的可能作用機(jī)制。
　　方法：細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)草酸鈣結(jié)晶(67μg/cm2)持續(xù)24小時(shí)來(lái)刺激

3、人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞（HK-2）來(lái)建立草酸鈣結(jié)石的細(xì)胞模型。試驗(yàn)時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)液中給予不同濃度的連錢草(0.5,1.0,2.0, or4.0mg/mL) or1.0mg/mL檸檬酸鉀，當(dāng)CaOx結(jié)晶作用HK-2細(xì)胞1天后，收集細(xì)胞及培養(yǎng)液，并檢測(cè)氧化應(yīng)激的指標(biāo)：丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶（SOD）以及過(guò)氧化氫酶(CAT)。而后用免疫印跡（Western blotting）檢測(cè)泌尿結(jié)石相關(guān)蛋白骨橋蛋白（OPN）和腎損傷分子-1(K

4、IM-1)的表達(dá)情況。
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，60只成年的雄性SD大鼠被隨機(jī)分入6組（分別為正常組、實(shí)驗(yàn)組、陽(yáng)性對(duì)照組、低中高濃度連錢草組）。當(dāng)大鼠適應(yīng)環(huán)境一周以后，予以實(shí)驗(yàn)組大鼠1%的乙二醇飼料喂養(yǎng)4周，同時(shí)以不同濃度水平的連錢草灌胃。于第28天將其置入代謝籠中，留取24h尿液標(biāo)本。10%的水合氯醛行腹腔注射麻醉大鼠后，采集血標(biāo)本和腎標(biāo)本。而后檢測(cè)尿液中的各項(xiàng)生化指標(biāo)，在顯微鏡下觀察結(jié)晶的沉淀情況及病理變化情況，同時(shí)測(cè)定OPN以及KI