脈絡(luò)膜新生血管的基因表達(dá)譜及其防治的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：研究脈絡(luò)膜新生血管的基因表達(dá)譜；探索脈絡(luò)膜新生血管的有效防治方法。 方法：1.32只BN大鼠按數(shù)字隨機(jī)分為1w、2w、3w和4w共4組。右眼為實(shí)驗(yàn)眼；左眼為對(duì)照眼。實(shí)驗(yàn)眼應(yīng)用氪激光光凝視網(wǎng)膜，創(chuàng)建CNV動(dòng)物模型。光凝后1w、2w、3w和4w行FFA、HE、CD105免疫組化和脈絡(luò)膜鋪片CNV定量檢查。2.18只BN大鼠按數(shù)字隨機(jī)分為1w、2w和3w共3組。右眼為實(shí)驗(yàn)眼；左眼為對(duì)照眼。實(shí)驗(yàn)眼應(yīng)用氪激光光凝視網(wǎng)膜，創(chuàng)建CNV動(dòng)

2、物模型。光凝后1w、2w和3w獲取實(shí)驗(yàn)眼和對(duì)照眼的脈絡(luò)膜組織，提取脈絡(luò)膜組織的總RNA。將純化后的mRNA反轉(zhuǎn)錄，與基因芯片上的探針雜交，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)眼與對(duì)照眼脈絡(luò)膜組織差異表達(dá)的基因，對(duì)差異表達(dá)的基因進(jìn)行聚類分析。3.24只BN大鼠光凝后按數(shù)字隨機(jī)分為GM6001組、DMS0組和CONT組。GM6001組每眼球后注射0.1％GM6001混懸液0.2mL；DMSO組每眼球后注射二甲基亞砜0.2mL，CONT組不做處理。光凝后注射1次，以后每

3、隔3天注射1次，共5次。光凝后3w行FFA、HE、CD105免疫組化和脈絡(luò)膜鋪片CNV定量檢查。 結(jié)果：1.光凝后1w，光凝區(qū)FFA出現(xiàn)盤(pán)狀熒光素滲漏；光鏡下視網(wǎng)膜水腫、隆起，可見(jiàn)中性粒細(xì)胞、色素性巨噬細(xì)胞、遷移增殖的RPE細(xì)胞、纖維細(xì)胞及內(nèi)含紅細(xì)胞的新生血管；CD105免疫組化出現(xiàn)散在孤立的陽(yáng)性染色；CNV面積為(11.79±1.75)×103μm2。光凝后2w，光凝區(qū)FFA熒光素滲漏較1w時(shí)增加；光鏡下視網(wǎng)膜水腫消退，中性粒

4、細(xì)胞消失，色素性巨噬細(xì)胞減少，纖維細(xì)胞增多，RPE細(xì)胞增殖，CNV形成較1w時(shí)增多；CD105免疫組化陽(yáng)性染色與1w相比差異有顯著性(P＜0.01)；CNV面積與1w時(shí)相比差異有顯著性(P＜0.01)。光凝后3w，光凝區(qū)FFA熒光素滲漏較2w時(shí)有所增加；偶見(jiàn)色素性巨噬細(xì)胞，纖維細(xì)胞和進(jìn)一步遷移增殖的RPE細(xì)胞，大量新生血管形成；CD105免疫組化陽(yáng)性染色與2w時(shí)相比差異無(wú)顯著性(P＞0.05)；CNV面積與2w時(shí)相比差異無(wú)顯著性(P＞0

5、.05)。光凝后4w，光凝區(qū)FFA熒光素滲漏程度與3w相似；光鏡下色素性巨噬細(xì)胞消失，纖維細(xì)胞和遷移的RPE細(xì)胞進(jìn)一步增殖，大量新生血管被纖維細(xì)胞和遷移增殖的RPE細(xì)胞包裹；CD105免疫組化陽(yáng)性染色與3w相比差異無(wú)顯著性(P＞0.05)；CNV面積與3w相比差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。2.光凝后1w差異表達(dá)的基因共有427條；上調(diào)基因234條；下調(diào)基因193條。光凝后2w差異表達(dá)基因共有63條；上調(diào)基因46條；下調(diào)基因?yàn)?7條。光凝

6、后3w差異表達(dá)基因共有50條；上調(diào)基因?yàn)?條；下調(diào)基因?yàn)?2條。MMP2、MMP9、MMP23、MMP24基因在光凝后1w、2w和3w均有較高水平表達(dá)。3.GM6001組、DMSO組和C0NT組光凝后3wFFA光凝區(qū)均可見(jiàn)熒光素滲漏，但GM6001組熒光素滲漏范圍明顯小于DMS0組和CONT組，DMS0組與CONT組的熒光素滲漏范圍相似。光鏡下CONT組光凝區(qū)內(nèi)可見(jiàn)大量新生血管、分層增殖遷移的RPE細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和膠原纖維；DMSO組

7、與CONT組相似；GM6001組光凝區(qū)增殖的RPE細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和新生血管較少。3組光凝區(qū)均可見(jiàn)CD105陽(yáng)性表達(dá)，但GM6001組與CONT組和DMSO組比較差異有顯著性(P＜0.01)，而CONT組與DMS0組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。GM6001組CNV面積與CONT組和DMSO組比較差異有顯著性(P＜0.01)。而CONT組與DMS0組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。 結(jié)論：1.氪激光誘發(fā)BN大鼠產(chǎn)生CNV的