參附注射液對HK-2細(xì)胞缺氧再復(fù)氧損傷的改善作用及機(jī)制.pdf

1、背景:隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步，許多組織、器官缺血后能在短時(shí)間內(nèi)重新獲得血流灌注。然而有時(shí)這種血流再灌注卻加重器官的功能障礙和結(jié)構(gòu)損傷，此現(xiàn)象稱為缺血再灌注損傷(IRI)。腎是富血流的器官，對IRI相當(dāng)敏感。IRI是缺血性急性腎功能衰竭(ARF)的重要發(fā)病機(jī)制，在腎移植過程中，它是導(dǎo)致早期移植腎功能障礙，甚至急性排斥反應(yīng)的重要因素。盡管近年來治療技術(shù)有了一定的發(fā)展，ARF仍然有較高的發(fā)病率和死亡率。因此，研究腎IRI的發(fā)病機(jī)制，尋求新的針對I

2、RI本身的防治方法具有重要意義。近年來研究證實(shí)，腎IRI是一個(gè)多因素、多途徑參與的復(fù)雜病理生理過程：腎組織經(jīng)歷缺氧再復(fù)氧的打擊后，通過氧自由基的損傷作用、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、炎癥因子浸潤等途徑，導(dǎo)致毛細(xì)血管通透性增加、腎間質(zhì)水腫以及急性腎小管壞死。因此有效的治療IRI的方法應(yīng)從多方面來阻斷這種病理生理過程。參附注射液(SF)的主要有效成分為人參皂甙，臨床上已應(yīng)用于治療心、腦、腸的缺血再灌注損傷。它可通過清除氧自由基、拮抗細(xì)胞內(nèi)鈣超載、抑制炎癥

3、細(xì)胞浸潤等機(jī)制減輕IRI，保護(hù)臟器功能。目前對于參附注射液在腎IRI中的改善作用和機(jī)制的研究較少，其在腎臟作用的靶點(diǎn)和效應(yīng)尚待進(jìn)一步研究。 目的:采用人近端腎小管上皮細(xì)胞系HK-2細(xì)胞建立腎急性缺血再灌注損傷的體外模型，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)室已完成的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步在細(xì)胞、分子水平探討參附注射液在腎IRI的改善作用及其機(jī)制，從而為參附注射液在腎臟病領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法:實(shí)驗(yàn)分5組：正常對照組、單純?nèi)毖踉購?fù)氧組(IRI

4、)、低濃度參附(1％)+IRI組、中濃度參附(2％)+IRI組、高濃度參附(5％)+IRI組。體外培養(yǎng)HK-2細(xì)胞，以雙氣道孵箱營造含1％O2、5％CO2的缺氧環(huán)境，細(xì)胞放回常規(guī)孵箱為復(fù)氧。觀察各組細(xì)胞在缺氧4h再復(fù)氧8h刺激下的反應(yīng)。 1.用流式細(xì)胞儀PI染色法和TUNEL檢測細(xì)胞凋亡比例； 2.用激光共聚焦顯微鏡檢測經(jīng)Fluo-3AM標(biāo)記的細(xì)胞內(nèi)鈣濃度； 3.用ELISA檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中MCP-1的濃度。

5、 結(jié)果: 1.SF減少細(xì)胞在缺氧再復(fù)氧刺激后的凋亡率，并呈劑量依賴性，5％SF組凋亡率最低，并與單純IRI組有顯著差異。流式細(xì)胞術(shù)與TUNEL法檢測的凋亡率一致。 2.SF抑制缺氧再復(fù)氧刺激后的細(xì)胞內(nèi)鈣超載，并呈劑量依賴性，5％SF組細(xì)胞內(nèi)鈣熒光值最低，與單純IRI組相比有顯著差異。 3.HK-2細(xì)胞正常情況下分泌少量的MCP-1，在缺氧再復(fù)氧刺激下分泌量增加。SF有抑制腎小管上皮細(xì)胞分泌MCP-1的作用，但