胰島素樣生長因子-1對HK-2細胞缺氧復氧損傷的相關保護作用研究.pdf

1、目的：探討研究缺氧復氧損傷對人腎小管上皮細胞的損害和在胰島素樣生長因子-1(IGF-1)干預后對細胞凋亡基因相關蛋白Bcl-2和水通道蛋白AQP-1的影響及可能保護機制。
　　 方法：常規(guī)體外培養(yǎng)HK-2細胞，無血清培養(yǎng)基同步化培養(yǎng)24h后隨機分為5組：①正常對照(C組)：細胞不予特殊處理，按常規(guī)方法培養(yǎng)。②缺氧復氧損傷模型組(H/R組):用終濃度300μmol/L的氯化鈷(CoCl2)處理60min后更換成含10[％]FBS的

2、DMEM/F12培養(yǎng)基，繼續(xù)常規(guī)培養(yǎng)24h；③預先給藥組(B組):預先給予終濃度200ng/ml的IGF-1，培養(yǎng)60min后去除上清液，換為終濃度300μmol/L的CoCl2培養(yǎng)孵育60min，再更換為10[％]FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)24 h。④即時給藥組(S組):同時給予HK-2細胞終濃度300μmol/L的CoC12和終濃度200ng/ml的IGF-1，培養(yǎng)60min后更換為10[％]FBS的DMEM/F12培養(yǎng)

3、液繼續(xù)培養(yǎng)24 h。⑤延遲給藥組(A組):先用終濃度300μmol/LCoCl2模擬缺氧，處理60 min后去上清液，加入終濃度200ng/ml的IGF-1培養(yǎng)1h，更換為正常10[％]FBS的DMEM/F12培養(yǎng)液后繼續(xù)常規(guī)培養(yǎng)24 h。上述各實驗組細胞處理完后：倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，用MTT法檢測細胞增殖活性、流式細胞儀分析細胞凋亡情況、LDH試劑盒檢測各組細胞上清液LDH漏出量，細胞免疫組化方法檢測Bcl-2與AQP-1的

4、表達變化、Real-time 熒光定量PCR檢測Bcl-2 mRNA與AQP-1 mRNA表達水平變化。
　　 結果：⑴成功構建HK-2細胞缺氧復氧模型；⑵ MTT法測細胞OD值：H/R組較C組明顯降低(P<0.05)，3個IGF-1 干預組較H/R組OD值有所升高，以B組上升最明顯(P<0.01)。⑶流式細胞儀測得細胞凋亡率：正常C組僅存在極低凋亡率(2.06±0.38[％])，H/R組細胞凋亡率較C組明顯升高(P<0.05)

5、，3個IGF-1 干預組較H/R組顯著下降(P<0.05)，其中又以B組下降最明顯(P<0.01)。⑷細胞上清液的LDH 漏出量;缺氧復氧損傷模型組(H/R組)LDH 活性較C組顯著增加(P<0.01)，IGF-1 干預處理組較H/R組漏出量減少，以B組降低最明顯(P<0.01)。⑸免疫組化和實時熒光定量PCR顯示：H/R組AQP-1mRNA和Bcl-2 mRNA表達較C組降低(P<0.05)，細胞免疫組化顯示AQP-1 與Bcl-2蛋