膿毒癥大鼠急性肺損傷及其防治機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分 NF-кB與PLA2在脂多糖致大鼠急性肺損傷中的作用機(jī)制 目的：研究脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）所致急性肺損傷（Acute lung injury，ALI）的病理過(guò)程，探討NF-кB與PLA2在LPS所致ALI中的作用機(jī)制。 方法：SD雄性大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組。靜脈注射LPS（6mg/kg）復(fù)制ALI的動(dòng)物模型。對(duì)照組靜脈注射等公斤體重的生理鹽水。每組各分為注射后2小時(shí)、4小時(shí)、

2、8小時(shí)、12小時(shí)四個(gè)亞組，每組8只大鼠。分別于各時(shí)間點(diǎn)麻醉后活殺，取肺組織測(cè)定肺濕/干重比，石蠟包埋切片HE染色行肺組織病理評(píng)分，肺泡支氣管灌洗提取肺泡巨噬細(xì)胞（Alveolar macrophages，AM）中性紅法測(cè)定吞噬功能、TUNEL法檢測(cè)凋亡率及免疫組化法檢測(cè)核因子-к Bp65蛋白（Nuclear factor-к Bp65，NF-к Bp65）表達(dá)，逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應(yīng)（Reverse transcription-poly

3、merase chain reaction，RT-PCR）法檢測(cè) AM的分泌型磷脂酶A2ⅡA型（Secretory phospholipase A2 typeⅡA，sPLA2ⅡA）、Bcl2、Bax mRNA的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。 結(jié)果：與對(duì)照組各對(duì)應(yīng)時(shí)間點(diǎn)相比，模型組肺干/濕比、肺組織病理評(píng)分、AM的NF-к Bp65表達(dá)及凋亡、AM的sPLA2ⅡA基因表達(dá)增加（P<0.01），AM吞噬功能、Bcl2、Bax基因的表達(dá)下降（P<0.01

4、）。 結(jié)論： 1.采用尾靜脈注射LPS方法可成功地復(fù)制大鼠急性肺損傷模型。此方法操作簡(jiǎn)單、易行、結(jié)果穩(wěn)定。 2.注射LPS后，呈時(shí)間依賴(lài)性地促進(jìn)AM sPLA2ⅡA基因表達(dá)、NF-кB活化及AM的凋亡，肺損傷程度亦隨之加重，提示LPS致ALI與AM的NF-кB活化、sPLA2ⅡA基因表達(dá)、AM的凋亡相關(guān)。 第二部分氯喹及PDTC防治膿毒癥大鼠急性肺損傷的作用機(jī)制 目的：研究脂多糖（LPS）所致急性

5、肺損傷（ALI）的病理生理過(guò)程，探討氯喹及吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽（PDTC）對(duì)LPS所致ALI的保護(hù)性作用機(jī)制。 方法：SD雄性大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、模型組、氯喹干預(yù)組、PDTC預(yù)防組。靜脈注射LPS（6mg/kg）復(fù)制ALI的動(dòng)物模型。氯喹干預(yù)組是在注射LPS后立即予以氯喹（30mg/kg）腹腔注射，PDTC預(yù)防組是在注射LPS前30min予以PDTC（120mg/kg）腹腔注射，對(duì)照組靜脈注射等公斤體重的生理鹽水。測(cè)定肺濕/干

6、重比，肺組織病理評(píng)分，肺泡巨噬細(xì)胞（AM）凋亡率及核因子-кBp65（NF-кBp65）表達(dá)，并檢測(cè)AM的sPLA2ⅡA、Bcl2、Bax基因的表達(dá)。 結(jié)果：與對(duì)照組相比，模型組肺干/濕比、肺組織病理評(píng)分、AM的NF-к Bp65表達(dá)及凋亡、AM的sPLA2ⅡA基因表達(dá)增加（P<0.05），AM Bcl2、Bax基因的表達(dá)下降（P<0.05）。與模型組相比，氯喹干預(yù)組和PDTC預(yù)防組上述改變得以逆轉(zhuǎn)，肺損傷程度明顯減輕（P<0.