狼爪瓦松愈傷組織生物量和有效物質(zhì)積累的研究.pdf

1、瓦松屬植物具有很高的藥用價(jià)值，市場(chǎng)需求量較大。但由于自然環(huán)境和人工栽培方面的種種原因，有效成分的含量也不穩(wěn)定、產(chǎn)量低，難以滿足市場(chǎng)需求。所以，探尋一種獲得可靠原材料的途徑對(duì)于瓦松屬植物產(chǎn)品生產(chǎn)和開(kāi)發(fā)具有重要的意義。因此，本研究通過(guò)培養(yǎng)富含有效物質(zhì)的瓦松愈傷組織，旨在為其產(chǎn)品生產(chǎn)提供大量愈傷組織作為另一種原材料打下理論基礎(chǔ)。因此，本試驗(yàn)以長(zhǎng)白山地區(qū)狼爪瓦松的種子為試驗(yàn)材料進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，研究影響愈傷組織生物量和有效物質(zhì)積累的多種因素，同

2、時(shí)利用生物反應(yīng)器進(jìn)行了愈傷組織大量培養(yǎng)的研究。
　　為了探明MS培養(yǎng)基濃度和6-芐氨基腺嘌呤（6-BA）及萘乙酸（NAA）濃度組合對(duì)狼爪瓦松愈傷組織的生物量和有效物質(zhì)積累（多糖、酚、黃酮）的影響，本研究采用均勻設(shè)計(jì)法進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在1倍MS培養(yǎng)基與6-BA3.5mg·L-1和NAA0.1mg·L-1的組合處理中愈傷組織生物量有效物質(zhì)含量最高。通過(guò)研究培養(yǎng)基中蔗糖的影響，發(fā)現(xiàn)30g·L-1的蔗糖明顯好于其他蔗糖濃度處理。另

3、外，MS培養(yǎng)基中總氮濃度、銨態(tài)氮和硝態(tài)氮濃度及磷濃度的也有顯著的影響，當(dāng)培養(yǎng)基中總氮濃度調(diào)節(jié)為60mM時(shí)，愈傷組織生物量及黃酮和多糖含量最大，而多酚含量在氮濃度為30mM時(shí)最高；當(dāng)培養(yǎng)基中銨態(tài)氮和硝態(tài)氮的濃度均調(diào)節(jié)為30mM時(shí)，愈傷組織生長(zhǎng)最旺盛，有效物質(zhì)含量也最高；培養(yǎng)基中磷濃度調(diào)節(jié)為2mM時(shí)，最適宜愈傷組織的生物量積累。
　　本研究利用3L氣球型氣升式反應(yīng)器進(jìn)行了愈傷組織培養(yǎng)。為確定愈傷組織反應(yīng)器培養(yǎng)的最佳時(shí)期，研究了愈傷組織

4、生物量和有效物質(zhì)積累的動(dòng)態(tài)，發(fā)現(xiàn)20d時(shí)生物量達(dá)最大，20～30d時(shí)無(wú)明顯變化，30d時(shí)下降；有效物質(zhì)的生產(chǎn)量在25d時(shí)最高，因此，狼爪瓦松愈傷組織反應(yīng)器培養(yǎng)時(shí)期以25d為最佳。對(duì)反應(yīng)器培養(yǎng)中通氣量的影響進(jìn)行研究的結(jié)果，通氣量為0.15vvm時(shí)，最利于愈傷組織生物量和有效物質(zhì)的積累，可獲得634.2mg·L-1的多糖，129.0mg·L-1的酚和112.5mg·L-1的黃酮。本研究表明利用植物細(xì)胞培養(yǎng)手段，通過(guò)培養(yǎng)基的調(diào)控及生物反應(yīng)器應(yīng)